目的:评价丝胶支架搭载mi R29-EVs处理过的原代成肌细胞治疗严重骨骼肌损伤的修复效果。方法:我们提取并鉴定了原代成肌细胞。制备了丝胶支架,研究了其对原代成肌细胞和成纤维细胞的作用。提取和鉴定了mi R29-EVs,并体外验证了mi R29-EVs对原代成肌细胞的作用。注射CTX造成C57/BL6小鼠胫骨前肌严重损伤,损伤早期(损伤后2周和4周)从组织学和功能学方面评估丝胶支架搭载mi R29-EVs处理过的原代成肌细胞治疗严重骨骼肌损伤模型的效果。结果:我们提取的原代成肌细胞的纯度达到了85%,在体外可以相互融合形成肌管,满足肌肉修复的需求。丝胶支架的孔隙率为93%,平均孔径为173μm。丝胶支架可以支持原代成肌细胞的粘附生长。丝胶支架移植到体内6周基本降解完毕,丝胶支架降解液在体外下调成纤维细胞纤维化相关蛋白Col1a1和Vimentin的水平。EVs作为核酸载体,具有优良生物相容性、高递送效率和保护mi R29免受降解的作用。体外实验证明,在有或无TGF-β1刺激下,mi R29-EVs都能促进成肌细胞分化形成肌管。mi R29-EVs可以上调成肌细胞的成肌分化基因Myo D1、My HC、Myogenin、α-Actin、Troponin的m RNA水平,下调纤维化相关基因Col1A1、Col1A2、Col3A1、α-SMA、Vimentin以及mi R29靶基因Yy1和Lims1的m RNA水平,进而促进成肌细胞向肌管分化,抑制其向肌成纤维细胞转化。在骨骼肌严重损伤后,丝胶支架搭载mi R29-EVs处理过的原代成肌细胞治疗在短时间内(损伤后4周)有效地恢复了肌纤维的正常结构,减少了骨骼肌纤维化的发生,恢复了肌肉收缩功能。结论:丝胶支架搭载mi R29-EVs处理过的原代成肌细胞的体内应用是治疗严重骨骼肌损伤模型的一个有效方法。