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脾胃为后天之本，水谷之海，气血生化之源，人体脏腑器官、营卫经络、形体官窍，元气之滋养全在脾胃，五脏六腑皆受气于胃。脾之气血阴阳不足，运化摄纳功能失职则导致脾虚。脾虚证是以一系列的消化和吸收障碍为主的综合证候，脾阳虚是在脾气虚严重，累及于阳时所导致的证候，它的现代研究一直是中医基础理论研究的重要组成。近些年来对脾虚消化功能评价的实验指标包括组织形态改变、胃肠激素调节、能量物质代谢、细胞信号转导、细胞表达、免疫调控和基因表达等，对脾虚证的现代研究涉及到血液动力改变、酶学变化、代谢功能异常、神经功能紊乱、自由基代谢出现异常等很多方面。由于蛋白组学技术的不断进步，用蛋白组学研究脾虚证也取得了一定进展，同时随着逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术的成熟与完善，可用于检测细胞中基因表达水平。本实验通过采用RT-PCR的方法，以脾阳虚大鼠为模型，采用健康组、健脾中药组为对照，从基因水平对用蛋白组学已筛选出的差异蛋白进行检测，以探讨脾阳虚证现代生物学基础。目的：本实验旨在利用现代分子生物学RT-PCR的实验方法，对运用蛋白组学技术鉴定出来与脾阳虚相关的结蛋白、角蛋白8、埃兹蛋白、丙酮酸激酶、甘油醛三磷酸脱氢酶，从基因水平检测这些蛋白质mRNA表达差异性，从基因水平阐述脾阳虚证生理病理机制，温补脾阳方药作用机制，从而为临床诊断及治疗提供依据。材料与方法：选用SPF级SD大鼠36只，分成三组，采用饮食不节（单日喂饲甘蓝，双日喂饲猪油）和加劳累过度（游泳至耐力极限），并给予番泻叶水浸剂灌胃方法塑造脾阳虚大鼠模型，给予中药附子理中汤、生理盐水灌胃干预。采用蛋白质组学技术鉴定脾阳虚大鼠回肠组织差异蛋白。用RT-PCR的方法，经过引物设计、RNA提取、检测、RT体系建立、PCR反应、电泳和凝胶成像系统分析，从基因水平检测差异蛋白mRNA的差异性表达。结果：1.本研究团队前期应用蛋白质组学鉴定出的与脾阳虚相关的差异蛋白有6个，其中4个上调，2个下调。上调的4个蛋白分别为结蛋白（Desmin）、角蛋白8（Krt8）、丙酮酸激酶（pyruvate kinase）、埃兹蛋白（Ezrin），下调的2个蛋白为甘油醛三磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3phosphate dehydrogenase）、肌动蛋白（Actin）。其中结蛋白、角蛋白8、肌动蛋白属于细胞骨架蛋白，甘油醛三磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶参与糖代谢，埃兹蛋白属于信号通路蛋白。2.运用RT-PCR分子生物学技术，经反转录酶的作用从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。对脾阳虚模型大鼠相关的6个蛋白质从基因水平研究表达差异：其中脾阳虚大鼠结蛋白的mRNA表达水平较正常组无明显差异（P>0.05）。脾阳虚大鼠角蛋白8、丙酮酸激酶、埃兹蛋白、甘油醛三磷酸脱氢酶的mRNA表达水平较正常组有明显差异（P <0.05）。3.脾阳虚大鼠回肠组织的甘油醛三磷酸脱氢酶的mRNA表达与正常组比较具有十分明显的减弱，与蛋白组学鉴定的表达下调的结果相一致，所以此蛋白可能与脾阳虚证相关。4.脾阳虚大鼠回肠组织的角蛋白8、丙酮酸激酶、埃兹蛋白的mRNA表达与正常组相比明显增强，与蛋白组学鉴定的表达上调的结果相一致，所以这些蛋白可能与脾阳虚证相关。5.健脾中药组大鼠的角蛋白8、丙酮酸激酶、埃兹蛋白的mRNA表达与脾阳虚模型组相比明显降低，甘油醛三磷酸脱氢酶的mRNA表达与脾阳虚模型组相比明显增加。结论：1.本研究团队前期应用蛋白质组学鉴定出与脾阳虚相关6个差异蛋白：上调的4个蛋白分别为结蛋白、角蛋白8、丙酮酸激酶、埃兹蛋白，下调的2个蛋白分别为甘油醛三磷酸脱氢酶、肌动蛋白。2.细胞骨架蛋白中结蛋白mRNA表达水平较正常组无差异。角蛋白8mRNA表达水平较正常组有明显差异，脾阳虚可能引起细胞骨架蛋白角蛋白出现异常。3.信号通路蛋白埃兹蛋白、参与糖代谢的蛋白丙酮酸激酶和甘油醛三磷酸脱氢酶的mRNA表达水平较正常组有明显差异，脾阳虚可能引起信号通路蛋白的埃兹蛋白和参与糖代谢的丙酮酸激酶和甘油醛三磷酸脱氢酶出现异常。4.脾阳虚大鼠回肠组织相关差异蛋白角蛋白、丙酮酸激酶、埃兹蛋白、甘油醛三磷酸脱氢酶的mRNA表达强弱均与蛋白组学鉴定的表达上调与下调的结果相一致。5.健脾中药组大鼠服用附子理中汤后，均有明显的疗效。