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目的:探讨miR-1-3p通过调控肿瘤免疫相关因子抑制肝癌细胞肿瘤生物学功能及其分子机制的研究。方法:第一部分:miR-1-3p调控PD-L1基因的表达;1、利用过表达miR-1-3p的慢病毒转染肝癌细胞系(Hep3B、Hep G2),通过q RT-PCR检测转染效率。采用流式细胞术分选成功转染miR-1-3p的肝癌细胞,提高转染纯度,建立稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系;2、通过生物信息学软件(RNA-hybridization)预测miR-1-3p的潜在下靶点;3、通过q RT-PCR和Western blotting检测过表达miR-1-3p组、miR-NC组、mock组中下游靶点的表达变化;4、进一步在建立的稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中转染miR-1-3p的抑制剂(inhibitor),下调miR-1-3p的表达,并通过q RT-PCR和Western blotting检测inhibitor的抑制效率和下游基因的表达变化。5、双荧光素酶报告实验miR-1-3p与下游基因的靶向关系;的肿瘤生物学功能1、在普通肝癌细胞系和稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中,同时转染si RNA沉默PD-L1,使PD-L1的表达下调,并通过q RT-PCR和Western blotting检测si RNA的沉默效率和PD-L1基因的表达变化;2、向稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中转染miR-1-3p抑制剂抑制miR-1-3p的表达,观察抑制miR-1-3p的表达后肝癌细胞的生长变化;在加入miR-1-3p抑制剂的过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中继续转染PD-L1的si RNA,沉默PD-L1的表达,观察在低表达miR-1-3p的肝癌细胞中,沉默PD-L1基因的表达后对体外细胞增殖、克隆、划痕、侵袭、凋亡以及裸鼠成瘤等各方面产生的影响。第二部分:miR-1-3p通过靶向调控PD-L1基因的表达抑制肝癌细胞结果:第一部分:miR-1-3p抑制PD-L1基因的表达1、转染过表达miR-1-3p慢病毒至肝癌细胞系(Hep3B、Hep G2)后,经q RT-PCR检测结果提示:在肝癌细胞系中成功过表达miR-1-3p。流式细胞术检测结果提示:Hep3B中miR-1-3p的转染纯度提高至93.3%,Hep G2的miR-1-3p转染纯度提高至91.5%;2、生物信息学软件(RNA-hybridization)预测到肿瘤免疫分子PD-L1是miR-1-3p的潜在下游靶点;3、转染过表达miR-1-3p的慢病毒,使肝癌细胞过表达miR-1-3p,经q RT-PCR技术和Western blotting检测下游基因PD-L1的表达变化,两者结果提示:过表达miR-1-3p后,PD-L1在m RNA水平和蛋白水平的表达均下调;4、转染miR-1-3p抑制剂至稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系后,经q RT-PCR技术和Western blotting结果提示:抑制miR-1-3p后,PD-L1在m RNA水平和蛋白水平的表达均上升。5、双萤光素酶报告实验证明miR-1-3p抑制PD-L1基因的表达。第二部分:miR-1-3p下调PD-L1表达抑制肝癌细胞增殖、克隆、迁移、侵袭、裸鼠成瘤以及促进肝癌细胞凋亡1、转染PD-L1的si RNA至普通肝癌细胞系和稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中,经q RT-PCR技术和Western blotting结果提示:si RNA在m RNA水平和蛋白水平有效沉默PD-L1基因的表达;2、向稳定过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中转染miR-1-3p抑制剂抑制miR-1-3p的表达后,观察到其促进了肝癌细胞增殖、克隆、迁移、侵袭、裸鼠成瘤以及抑制肝癌细胞凋亡;在加入miR-1-3p抑制剂的过表达miR-1-3p的肝癌细胞系中继续转染si RNA沉默PD-L1的表达后,观察到加入si RNA后,抑制了细胞的增殖、克隆、划痕、侵袭以及裸鼠成瘤,促进了肝癌细胞的凋亡。结论:miR-1-3p通过调控肿瘤免疫相关因子PD-L1基因的表达抑制肝癌细胞肿瘤生物学功能。