磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethazine,SM2),属于磺胺类药物中应用相对广泛的一种,具有氨基苯磺酰胺的特殊结构,它是一种广谱抗菌药物,由于其见效快,成本低,易获得,被广泛应用于预防和治疗动物原虫病和细菌性疾病。SM2能够促进动物生长,故常被当作饲料添加剂在动物饲养中长期使用。若不合理使用SM2,易残留在畜产品中,人食用后危害人体健康。世界各国对相关食品中磺胺类药物的残留均做出了相应的规定,欧盟国家规定磺胺类药物残留总量不得超出100μg/kg,单个药物不得超过25μg/kg。日本规定在食品中不得检出磺胺类药物。我国农业部于2002年12月在第235号文件中规定,在所有动物的脂肪、肌肉、肝脏和肾脏中磺胺类药物的残留限量不得超出100μg/kg,并且将磺胺二甲基嘧啶列为兽药残留监控的重点。目前,用微生物学、仪器和酶联免疫等方法来检测SM2。其中微生物法检测速率高,但灵敏度低,特殊的选择性差,仪器检测方法准备样品的时候浪费时间、繁琐、仪器太贵而且需要专业人员操作才能完成。而酶联免疫检测法灵敏度高、速度快、可批量筛选,无需大型仪器设备,比较适用于大量样本的初次筛选。本实验用重氮化法合成了SM2与血蓝蛋白(SM2,KLH)免疫抗原和SM2与牛血清蛋白(SM2,BSA)包被抗原,经BCA法、紫外光谱扫描和SDS-PAGE验证SM2与载体蛋白偶联成功;用合成的SM2-KLH人工完全抗原对BALB/c小鼠进行免疫,通过杂交瘤技术和有限稀释法经过四次亚克隆,得到了一株能稳定分泌抗SM2的特异性抗体的杂交瘤细胞株。然后扩培这个细胞株,采用小鼠体内诱生法而获取腹水,再进行纯化来获得目的抗体。经免疫球蛋白亚型鉴定,得出1E10的重链是IgG1型,轻链是Kappa。抗原达到50%抑制率的最佳包被浓度为1:6000,抗体最佳工作浓度为1:5000。方法的创新为以后的研究提供了新的思路,在酶联免疫(ELISA)法的基础上,本课题对检测条件进行优化,能够更快速、有效的检测,为后续的研究奠定了基础。