LINC00473在胃癌中的作用与机制研究

来源 :江苏大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lwl13751412186
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目的:检测长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA),LINC00473在正常胃黏膜上皮细胞及各胃癌细胞株、非癌症胃组织与胃癌组织的表达水平,探索LINC00473在胃癌细胞转移、增殖、细胞凋亡中的作用及其分子机制,为胃癌提供新的诊断标志物和治疗靶点。  方法:采用实时荧光定量PCR的方法,检测正常胃粘膜上皮细胞与各胃癌细胞株以及非癌症胃组织与胃癌组织中LINC00473 mRNA水平的表达差异;运用RNA干扰技术(RNAi)将基因沉默并采用实时荧光定量PCR的方法检测干扰效率、Western blot方法探讨抑制LINC00473表达后对EMT的相关基因(E-cadherin、N-cadherin、snail、vimentin等基因)表达的影响;通过CCK-8细胞增殖实验、克隆形成实验以及Transwell迁移实验探讨LINC00473被沉默后对胃癌细胞的增殖和迁移能力的影响;采用质粒介导构建LINC00473的过表达质粒,并转染至BGC-823、MGC-803胃癌细胞株,实时荧光定量PCR的方法检测过表达的效率、探讨EMT相关基因表达的变化情况及其过表达之后对细胞增殖和迁移能力的影响;流式细胞术检测在胃癌细胞株干扰LINC00473之后对细胞凋亡的变化情况。  结果:实时荧光定量PCR的检测结果显示,LINC00473在胃粘膜上皮细胞中表达较高;在不同胃癌细胞株中表达有差异,进一步分析得知LINC00473的mRNA水平在BGC-823、MGC-803胃癌细胞株中表达较低,在SGC-7901、HGC-27胃癌细胞株中表达相对较高。在胃癌细胞株BGC-823、MGC-803过表达LINC00473后, EMT相关蛋白表达变化主要有:vimentin、snail以及N-cadherin的表达下降, E-cadherin的表达提升,抑制EMT过程的发生;相关功能试验也发现,在BGC-823、MGC-803细胞系中过表达LINC00473后CCK-8实验发现OD450值较对照组较低,形成的细胞克隆较对照组小而疏,Transwell实验发现细胞迁移过膜数明显减少,抑制了胃癌细胞的增殖和迁移能力; RNAi干扰抑制SGC-7901、HGC-27胃癌细胞中LINC00473的表达后,EMT相关蛋白的表达发生变化,具体表达变化为E-cadherin降低,N-cadherin、snail 、vimentin升高;对上皮间质转化起到诱导作用,平板克隆实验的克隆形成数量增多,C C K-8实验发现OD450值较对照组较高,Transwell实验发现细胞迁移过膜数明显增多,细胞的增殖和迁移能力呈一定程度的增高,干扰过后的细胞凋亡实验结果表明, LINC00473抑制细胞凋亡。  结论:LINC00473在胃癌患者肿瘤组织中低表达,LINC00473能抑制EMT发生,抑制胃癌细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡;因此,LINC00473将有望成为临床胃癌分子诊断的标志物,并为胃癌的治疗提供新思路。
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