【摘 要】
：
细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原 4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4或CD152）是免疫球蛋白相关受体家族的成员之一,主要表达于活化的T淋巴细胞上,是T细胞免疫应答中的负调节因子之一,对维持机体的免疫平衡具有重要作用。目前一些禽类病原是通过抑制淋巴器官或淋巴细胞的功能来降低机体的免疫力,以达到增强致病的目的,因此推断这些病毒可能在
【基金项目】
：
国家自然基金（31972717）; 国家重点研发计划项目（2016YFD0500800）; 江苏高校优势学科建设工程资助项目; 江苏省动物重要疫病与人畜共患病防控协同创新中心
论文部分内容阅读
细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原 4（cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4或CD152）是免疫球蛋白相关受体家族的成员之一,主要表达于活化的T淋巴细胞上,是T细胞免疫应答中的负调节因子之一,对维持机体的免疫平衡具有重要作用。目前一些禽类病原是通过抑制淋巴器官或淋巴细胞的功能来降低机体的免疫力,以达到增强致病的目的,因此推断这些病毒可能在抑制T细胞免疫应答中有一定影响。现阶段在人类癌症研究中已利用杂交瘤技术成功制备出CTLA-4单克隆抗体用于治疗实体瘤,但CTLA-4单克隆抗体在禽病中的研究还鲜有报道。本论文就鸡CTLA-4基因在昆虫细胞-杆状病毒表达系统（Bac-to-Bac Baculovirus Expression,Bac-to-Bac系统）中的表达、抗鸡CTLA-4单克隆抗体的制备、抗鸡CTLA-4单克隆抗体对LaSota株疫苗免疫效果的影响三个方面进行研究,希望为免疫检查点在禽病的发病机制、信号通路、疫苗研发等研究领域提供参考。1.鸡CTLA-4基因在Bac-to-Bac系统中的表达为了获得鸡CTLA-4在体外表达的蛋白,本研究从鸡的外周血中分离出淋巴细胞,通过提取RNA并进行逆转录,以cDNA作为模板,利用PCR方法扩增获得了鸡CTLA-4基因。将CTLA-4分别克隆到pET-32a原核表达载体质粒和杆状病毒供体质粒pFastBacHTA 中获得了 pET-32a-CTLA-4 和 pFastBacHTA-CTLA-4。将测序正确的pFastBacHTA-CTLA-4质粒转座到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选和抗性筛选获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-CTLA-4,将其转染到Sf9昆虫细胞中获得重组杆状病毒rBac-CTLA-4。用rBac-CTLA-4感染Sf9昆虫细胞,通过IFA和Western-blot分析,结果显示成功制备出能在Sf9昆虫细胞中高效表达CTLA-4蛋白的重组杆状病毒。2.抗鸡CTLA-4单克隆抗体的制备为获得能特异性针对鸡CTLA-4蛋白的单克隆抗体,本研究以第一章中制备的重组杆状病毒rBac-CTLA-4在Sf9昆虫细胞中表达的蛋白为免疫原,免疫6～8周龄的Balb/c小鼠,于第三次免疫后测得小鼠血清效价,采用B淋巴细胞融合技术将免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0融合,通过IFA筛选出3株能稳定分泌抗鸡CTLA-4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为:mAb-CTLA4-3D7、mAb-CTLA4-5A4、mAb-CTLA4-6A12。这些单抗均能够特异性的识别pCAGGS-CTLA-4-Flag真核表达系统和Bac-to-Bac系统中表达的CTLA-4蛋白。通过FCM和IFA分析,三株单抗与鸡的PBMC均有较好的结合活性,且mAb-CTLA4-3D7与CD3+T淋巴细胞的结合率约为16%。试验结果为进一步研究抗鸡CTLA-4单克隆抗体的生物学功能及其在禽类CTLA-4/B7信号通路中的作用奠定了基础。3.抗鸡CTLA-4单克隆抗体对LaSota株疫苗免疫效果的影响为进一步探索抗鸡CTLA-4单克隆抗体在禽类机体免疫系统内的作用机制,本研究将第二章中制备的mAb-CTLA4-3D7与新城疫LaSota疫苗株联合免疫2周龄的SPF鸡,通过新城疫血清抗体水平检测、免疫细胞因子水平检测、淋巴细胞转化实验、免疫器官指数测定、T淋巴细胞亚群检测等实验,分析抗鸡CTLA-4单克隆抗体对LaSota株免疫效果的影响。结果显示:抗体联合疫苗组与单独免疫疫苗组相比,新城疫血清抗体水平提高,且在21天时差异显著（*P<0.05）,28天时差异极显著（**P<0.01）;淋巴细胞体外增殖活性提高;鸡PBMC中CD3+、CD4+T淋巴细胞亚群的比例升高;鸡PBMC中IFN-γ、IL-2和IL-5免疫细胞因子有上升趋势,但不具有统计学意义;免疫器官指数无明显差异。试验结果为免疫检查点阻断剂在禽病疫苗佐剂中的研究提供了临床参考价值。
其他文献
目的 分析不同营养状况高龄冠心病患者阿托伐他汀的治疗效果及安全性。方法 选取2016年1月至2019年1月我院高龄（≥80岁）冠心病患者90例，使用MNA-SF量表进行评估后分为营养正常组（n=45）和营养不良组（n=45）,采用阿托伐他汀（20 mg/d）治疗6个月后，检测患者的血清总蛋白、白蛋白、总胆固醇（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、甘油三酯（T
亲子阅读是家庭教育中具有可操作性和目标性的亲职教育手段，自我认同的建构有助于儿童认识自己、接纳自己、完善自己，增强抗逆能力。文章通过文献探讨建构亲子阅读与自我认同的关联性模型，并以问卷调查的方式发现亲子阅读对自我认同构建影响显著，其中，阅读习惯对自我认同的影响最显著，而家庭期望对自我认同的影响力较小。
目的:建立甘草药材的HPLC指纹图谱，并研究其与抗氧化活性之间的谱效关系。方法:采用HPLC法建立甘草的指纹图谱；在与对照图谱相似度评价均大于0.915的基础上，结合聚类分析（hierarchical cluster analysis, HCA）和主成分分析（principal component analysis, PCA）,对其中的25个共有峰进行评价；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH
当下我国养老服务仍以大型院所机构为主,伴随着复合型照护需求的逐年提高,社区化的医养服务急缺。基于"9073"养老政策的再思考,文章尝试探索医养融合的路径,以构建"医、养、护、康"的产业多元闭环的方式,实现社会认同;其次,营建社区嵌入式的微型养老服务综合体,用"微机构化"的手段实现基层社区的服务下沉;最后,扁平医护网络顺应"去机构化"趋势,通过搭建社区医护交往平台,培训全日照护人员来满足全龄友好需求
背景:系统性红斑狼疮因其复杂的免疫表型和高度异质性的临床表现成为至今尚未攻克的医学难题。大规模基因转录组分析研究显示狼疮最重要的两大特征是干扰素特征和中性粒细胞相关性特征。然而,这两大特征间是否存在一定的内在联系仍不得而知。中性粒细胞作为狼疮高干扰素水平的来源正日益受到重视。系统性红斑狼疮的干扰素特征是指一系列干扰素诱导性基因的高表达,但即使这些可编码基因的总体功能仍覆盖不了狼疮的全部疾病表现,于
教师如何实现和家长的紧密协作，共同构建“为幼儿阅读成长同向同力”的良性共育模式呢？我园的具体做法是：幼儿园牵头，教师、幼儿、家长三者之间互相配合，努力做到“享、联、深”三方面的工作，追求共同的目标，达到共同期望的效果。
党的十八大以来农村实用人才队伍建设取得了前所未有的丰硕成绩，但还不能满足农村发展的内生需求。该文以内蒙古奈曼旗为例，从农村实用人才数量、结构、培训、服务、激励等方面对农村实用人才队伍建设问题进行分析，发现奈曼旗农村实用人才队伍建设仍面临着人才队伍建设整体性水平低、开放性不足及协同进化不佳的困境，进而基于人才生态学理论剖析了影响农村实用人才队伍建设的原因并提出了相应对策。
该文依据《建筑碳排放计算标准》（GB/T 51366—2019），并结合近年来相关研究，以二星级绿色建筑——重庆市设计院建研楼工程为例，计算了工程全生命周期碳排放量。计算得出项目全生命周期碳排放量为11633.59tCO2，单位面积碳排放量为3906.38kgCO2/m2，其中运行阶段碳排放量占53.67%，建材生产与运输阶段占40.96%，建造及拆除阶段占5.37%。通过对相关计算标准、研究成果
大数据时代下,传统的企业运营监控模式和理念已经无法满足企业发展需求,企业要想在激烈的市场竞争中生存发展必须创新运营监控模式。内蒙古电力公司在国家电网基础上进行蒙西电网运营监控体系的研发,于2019年底上线试运行。然而,照搬国网运监模板在蒙西电网显然有些"水土不服"。本文先通过分析蒙西电网与国家电网运监体系的本质差异与自身不足,