锦鲤疱疹病毒两个类蛋白激酶蛋白的研究

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锦鲤疱疹病毒首次暴发于以色列Magan Michael地区,由于其在2001年4月在以色列再次暴发而被以色列列入水生动物疾病名录。锦鲤疱疹病毒(Koi carpherpesvirus,KHV)具有极高的传染性,以及高致死率,对水产养殖造成了巨大的经济损失,因此如何有效的检测和预防KHV成为当前水产养殖业面临的严峻问题。  近年来多个实验室相继报道了一些有效的诊断方法,主要通过细胞培养分离技术、电镜技术、聚合酶链式反应、酶联免疫吸附测定、原位杂交技术以及恒温核酸扩增方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)等,其中PCR和细胞培养技术是世界动物卫生组织(World Organisation for Animal Health,OIE)推荐的最为有效的诊断方法。  由于依靠传统的方法难以获得有效的针对KHV的疫苗,基于已知ORF基因序列,基因工程疫苗的研究因其可靠稳定的优点而引起重视。但目前对于该病毒其他ORF的研究还未有进一步的报道,尤其是存在于疱疹病毒中的蛋白激酶在KHV中还未有报道。  通过荧光定量PCR检测了KHV在病毒感染宿主细胞0-96小时内11个基因的表达情况。通过结果发现,KHV的两个激酶类似物基因表达含量相对较低,其是否具有类似于哺乳类疱疹病毒蛋白激酶的功能,通过体外过表达的方法在HEK293T中过表达这两个激酶探讨其功能以及通过建立针对于这两个基因的核糖核酸干扰稳定转染细胞系,探讨在病毒感染宿主细胞后,这两个激酶受到抑制后出现的反应。  该论文发现ORF48及ORF104类蛋白激酶定位于细胞核,并能引起p38MAPK磷酸化水平的上调,导致下游基因如MEF-2A表达的明显上调。基因沉默实验由合作单位中山大学何建国老师实验室完成。本论文的研究补充了KHV病毒激酶类似基因研究的空白,为进一步研究KHV激酶的功能奠定了基础。
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