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结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一。虽然以手术和细胞毒药物联合生物靶向治疗的多学科治疗方案使结直肠癌的治疗效果取得了一定的提高，但结直肠癌的治疗仍然面临巨大挑战。相关研究资料表明近三十年来结直肠癌治疗效果的提高并不明显，最近大宗病例报告的结肠癌和直肠癌的术后5年生存率仍徘徊在70％和50％左右。目前，对于判断结直肠癌患者预后和选择治疗方法主要依靠TNM分期和其它一些病理指标，但临床上同一TNM分期、病理类型的结直肠癌患者，使用相同的治疗方案，疗效却不尽相同。TNM分期与病理诊断等传统的预测结直肠癌患者预后的方法并不能充分满足临床的要求，因此：目前迫切需要能够有效预测结直肠癌预后的生物分子标志物来优化结直肠癌治疗方案，实现结直肠癌的个体化治疗，进一步提高结直肠癌的治疗效果。GINS复合物是一个由PSF1、PSF2、PSF3和SLD5四个基因编码的异四倍体复合物，在核酸复制的起始和延伸阶段发挥重要作用。近年来国外研究发现GINS复合物在多种恶性肿瘤中表达上调，且GINS复合物表达与肿瘤的发生发展、预后密切相关，可作为预测肿瘤患者预后的分子标志物，并有可能成为肿瘤基因治疗的靶点。目前结直肠癌中GINS复合物各基因的表达及其临床意义尚未见报道。本研究运用实时荧光定量PCR技术检测结直肠癌组织和相匹配的正常黏膜组织中GINS复合物四个基因的表达水平，并分析其与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系，探讨GINS复合物作为预测结直肠癌预后分子指标的可能性，以期辅助结直肠癌的病理诊断并为其预后判断、治疗方案的选择提供了更全面的依据。进一步地，采用RNA干扰技术抑制人结肠癌细胞株LoVo、HT-29和HCT116中PSF1的表达，观察其对结肠癌细胞增殖的影响，并进一步探讨其可能的机制，为发现结肠癌基因治疗的新靶点提供理论依据。【目的】1、探讨GINS复合物在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。2、检测Sld配偶体1基因(PSF1)在结肠癌组织中的表达，探讨RNA干扰沉默PSF1表达对人结肠癌细胞增殖的影响及其可能的机制。【方法】1、运用实时荧光定量PCR方法，检测76例结直肠癌标本中GINS复合物四个基因PSF1、PSF2、PSF3和SLD5的mRNA表达量。2、分析结直肠癌标本中GINS复合物四个基因PSF1、PSF2、PSF3和SLD5表达与结直肠癌患者临床病理特征和预后的关系。3、采用Westernblot检测40例结肠癌标本中PSF1蛋白的表达水平。4、应用脂质体法将靶向PSF1的短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染人结肠癌细胞株LoVo、HT-29和HCT116，WesternBlot法检测PSF1蛋白表达变化。5、MTT法、软琼脂克隆形成实验检测转染PSF1shRNA干扰质粒对结肠癌细胞增殖活性、克隆形成能力的影响。6、流式细胞术、荧光定量PCR检测转染PSF1shRNA干扰质粒对结肠癌细胞细胞周期以及PSF2、PSF3和SLD5mRNA表达的影响。【结果】1、荧光定量PCR检测结果显示，结直肠癌组织中PSF1、PSF2、PSF3和SLD5mRNA的表达水平均显著高于正常结直肠黏膜组织，差异有统计学意义（P<0.01）。2、统计分析结果显示：PSF1mRNA表达与肿瘤大小（P<0.01）有关；PSF2mRNA表达与患者年龄（P<0.05）和淋巴结转移（P<0.05）有关；PSF3mRNA表达与临床病理特征无关（P>0.05）；SLD5mRNA表达与淋巴结转移（P<0.01）有关。PSF1、PSF2和SLD5高表达组患者的5年生存率均明显低于低表达组（P<0.05），多因素分析结果显示：PSF1mRNA表达（P<0.05）是影响结直肠癌患者预后的独立因素之一。3、Westernblot检测结果显示：结肠癌组织中PSF1蛋白的表达量为0.485±0.113，显著高于正常黏膜组织的0.056±0.014，差异有统计学意义（P<0.01）。4、Westernblot检测结果显示：转染PSF1shRNA干扰质粒后，LoVo、HT-29和HCT116细胞中PSF1蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05)，可见转染PSF1shRNA干扰质粒可有效抑制结肠癌细胞中PSF1蛋白表达。5、MTT法、软琼脂克隆形成实验结果显示：转染PSF1shRNA干扰质粒后，LoVo、HT-29和HCT116细胞增殖能力显著降低，克隆形成率明显下降，与阴性对照组及正常生长组细胞比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。6、流式细胞术、荧光定量PCR检测结果显示：转染PSF1shRNA干扰质粒后，LoVo、HT-29和HCT116细胞中S期细胞比例均明显增加，PSF2、PSF3和SLD5mRNA表达均明显下降，差异具有统计学意义(P＜0.05)。【结论】1、GINS复合物在结直肠癌组织中高表达，且与结直肠癌患者临床病理特征密切相关。2、GINS复合物的表达与结直肠癌患者预后密切相关，其中PSF1mRNA表达可作为预测结直肠癌患者预后的分子生物学指标。3、PSF1在结肠癌组织中高表达，转染PSF1shRNA干扰质粒能有效抑制PSF1表达，并抑制结肠癌细胞增殖，提示PSF1基因有望成为结肠癌靶向治疗的新靶点。