【摘 要】
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本文以大量制备ectoine为主要目的,从盐池底泥样品中分离出两株细菌SL7和SL41,通过对菌体基因组DNA的提取、16SrDNA的PCR扩增和系统树的建立,鉴定两株菌分别属于Halomonas菌
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本文以大量制备ectoine为主要目的,从盐池底泥样品中分离出两株细菌SL7和SL41,通过对菌体基因组DNA的提取、16SrDNA的PCR扩增和系统树的建立,鉴定两株菌分别属于Halomonas菌属和Brevibacterium菌属。
通过对两株菌ectoine合成量的比较,得到其中合成量较高的菌株SL7,确定ectoine合成的最适盐浓度为2M,温度30℃。利用菌株SL7进行发酵罐培养生产ectoine过程中,恒定的最佳pH为6.0,其合成量达到154mg/L；流加盐可以缩短发酵时间为32小时,但ectoine合成量降低了10％；流加蛋白胨,ectoine合成量达到221.53mg/L,提高了43％
菌体在0.5M盐浓度下释放ectoine,释放率达到64％,菌体存活率达到70％。对菌体进行二次合成培养,以蛋白胨为氮源的培养基最佳,盐浓度为2M,pH为6.5。在发酵罐中进行二次培养,合成量达到160 mg/L。
将释放后的ectoine溶液用活性炭脱色,最适加量为2g/100mL,最适脱色温度为100℃。利用732阳离子交换树脂对脱色后的溶液进行吸附纯化,通过静态吸附实验,确定最适吸附温度25℃,pH为4.62。通过洗脱实验,确定洗脱液的最佳pH和流速分别为11.85和3mL/min,洗脱率和纯度分别达到了90％和85％,证明用阳离子交换树脂对ectoine进行分离是可行的。
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