目的:制备复方恩诺沙星纳米乳,并对其质量、安全性、透皮性能以及初步临床疗效进行评价,为临床治疗犬脓皮病病提供一种药物新剂型。方法:(1)复方恩诺沙星纳米乳的制备:根据恩诺沙星在不同油相中的溶解度筛选合适的油相,结合伪三元相图筛选出最佳配方,以加水滴定法制备复方恩诺沙星纳米乳。(2)复方恩诺沙星纳米乳的质量评价:用染色法鉴定其结构类型,通过激光粒度分析仪测定其粒径大小、粒度分布、多分散系数,用透射电子显微镜观察其形态,用高效液相色谱法测定药物含量,经高速离心试验、光照试验、长期试验判断其稳定性。(3)复方恩诺沙星纳米乳的安全性评价:通过单次、多次给药皮肤刺激试验,皮肤过敏试验和皮肤急性毒性试验来考察其安全性。(4)复方恩诺沙星纳米乳的透皮试验:利用改良的Franz扩散装置比较复方恩诺沙星纳米乳、原药混合液的透皮性能。(5)复方恩诺沙星纳米乳的体外抑菌性能:用微量稀释法测定复方恩诺沙星纳米乳对病原菌的最小抑菌浓度,并与原药混合液进行对比。(6)复方恩诺沙星纳米乳的临床药效试验:以西北农林科技大学宠物医院脓皮病犬为研究对象,观察复方恩诺沙星纳米乳的临床药效。结果:(1)复方恩诺沙星纳米乳的配方:ENR 0.94 wt%,CL 0.40 wt%,油酸4.27wt%,混合表面活性剂TWEEN-20/2-苯乙醇(Km=3∶1)31.25 wt%,蒸馏水63.54 wt%;(2)所制备的纳米乳呈淡黄色,澄清透明,为水包油型结构,乳滴呈均匀的圆球形,大小均一,无黏连,平均粒径为14.50nm,多分散系数0.06,Zeta电位为-15.30mV;离心、光照、长期试验均无分层、絮凝、析出等现象。复方恩诺沙星纳米乳中恩诺沙星最佳检测波长为271nm,在6μg/ml~100μg/ml的浓度范围内与对应峰面积的线性关系良好,头孢氨苄最佳检测波长为262nm,在6μg/ml~100μg/ml的浓度范围内与对应峰面积的线性关系良好。(3)复方恩诺沙星纳米乳无皮肤刺激性、无急性毒性、无致敏性,为安全性较高的皮肤用药。(4)复方恩诺沙星纳米乳的透皮性能结果:复方恩诺沙星纳米乳、原药混合液中恩诺沙星的经皮渗透速率分别为156.75±0.30665μg/cm2.h、107.58±0.90362μg/cm2.h,头孢氨苄的经皮渗透速率分别为19.61±0.04834μg/cm2.h,13.574±0.07263μg/cm2.h,表明复方恩诺沙星纳米乳的透皮性能显著优于原药混合液组(P<0.01);皮肤切片展示复方恩诺沙星纳米乳对角质层的结构产生了改变,对胶原纤维原有的排列造成影响,从而提高药物在皮肤的渗透吸收。(5)复方恩诺沙星纳米乳的体外抑菌性能结果:复方恩诺沙星纳米乳对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、化脓棒状杆菌和无乳链球菌的MIC分别是0.125、0.125、0.5、0.125μg/ml,MBC分别是2、2、4、1μg/ml,优于恩诺沙星和头孢氨苄原料药液,说明以恩诺沙星、头孢氨苄联合用药,提高了抑菌活性。(6)临床药效结果显示,复方恩诺沙星纳米乳对脓皮病犬两周治愈率高于其他两种市售外用制剂。结论:制备的复方恩诺沙星纳米乳具有良好的稳定性、安全性和药效,符合纳米乳制剂的质量要求。