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目的:1.探索果蝇头状因子3(Grainyhead-like-3,GRHL3)和多药耐药基因1(multidrug resistance-1,MDR1)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达以及患者临床病理特征之间的关系,2.在细胞学水平上初步探究GRHL3其对于MDR1介导的多药耐药的调节关系。方法1.采用免疫组织化学方法检测136例HCC,60例癌旁肝组织及20例肝血管瘤标本中正常肝组织的GRHL3蛋白MDR1蛋白表达。通过多种途径收集其临床病理数据.2.通过Western blot法,分别检测人肝癌细胞系Bel-7402及耐药细胞系Bel-7402/5-FU中GRHL3蛋白和MDR1蛋白表达情况。3.为验证GRHL3是否通过调控MDR1影响肝癌细胞耐药,分别将携带GRHL3cDNA的表达载体PCMV-2B-GRHL3瞬时转染到肝癌细胞系Bel-7402进行过表达,将携带GRHL3-shRNA的GV287载体瞬时转染入耐药细胞系7402/5-FU进行干涉4.Western blot法检测四种细胞的GRHL3蛋白和MDR1蛋白表达量。结果1.GRHL3在肝细胞癌、癌旁组织、正常组织中阳性表达率分别为72%、53%、0,表达阳性的部位主要位于细胞核内,MDR1在肝细胞癌、癌旁组织、正常组织中阳性表达率分别为69%、52%、0,表达部位阳性主要位于细胞质内及细胞膜上。GRHL3和MDR1在肝细胞癌、癌旁组织、正常组织组织中阳性表达的概率都具有显著差异(P<0.001)。GRHL3蛋白表达阳性率与不同年龄、性别、门脉癌栓、肿瘤大小、是否存在HBs感染的患者差异无明显统计学意义;GRHL3蛋白表达阳性率与不同的甲胎蛋白水平(AFP)、TNM分期、病理分化程度差异有统计学意义(P<0.05);另外MDR1蛋白表达阳性率和不同的甲胎蛋白水平、TNM分期、病理分化程度及患者表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05),其余各病理数据无统计学意。2.通过Western blot法检测结果显示耐药细胞系Bel-7402/5-FU中GRHL3和MDR1的表达量明显高于敏感株细胞系Bel-7402且GRHL3和MDR1的表达呈明显正相关。3.通过Western blot法检测显示成功将携带FLAG和GRHL3 cDNA的表达载体PCMV-2B-GRHL3瞬转到肝癌细胞系Bel-7402进行过表达,将携带FLAG和GRHL3-shRNA的GV287载体瞬转到耐药细胞系Bel-7402/5-FU进行成功干涉。4.过量表达GRHL3后的敏感株细胞Bel-7402中MDR1的表达明显高于敏感株细胞Bel-7402,干涉过后的耐药细胞株Bel-7402/5-FU中MDR1蛋白的表达明显低未干扰耐药细胞Bel-7402/5-FU,进一步说明了在肝癌细胞中MDR1的表达可能受到GRHL3基因正向调控。结论1.GRHL3及MDR1在HCC组织中均高表达具有明显的正向相关性且与患者的临床病理特征如甲胎蛋白水平(AFP)、TNM分期、病理分化程度之间有明显关系,可能在耐药的发生中可能起着关键作用,提示患者预后不良。2.GRHL3基因可能通过正向调控MDR1表达对于肝癌的耐药有重大影响。