[目的]乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染已成为世界性健康问题,特别是中国乙型肝炎患病率高。现随着核苷类药物长期、广泛使用,HBV耐药发生率越来越高,这已成为临床抗病毒治疗过程中一大难题。本研究利用高通量测序也称为二代测序(Next generation sequencing,NGS),对慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者进行深度测序,研究NGS在HBV多耐药位点及基因分型的应用价值。[方法]选取2018年5月至2019年3月期间,于昆明医科大学第一附属医院、昆明医科大学第二附属医院及昆明市传染病医院收集89例确诊感染HBV患者血清标本,使用NGS法检测HBV基因型分布及耐药位点分析;完善患者的临床资料,分析野生型和突变株之间临床实验室指标的差异,并评估其临床应用价值。[结果]HBV基因分型检测中,B型患者33例、C型 52例、B+C型患者4例,本研究人群主要以C型为主,占比58.4%;检出突变株阳性患者9例,共检出耐药突变位点 7 个:M/V207i、M204I、M250L、M250I、V173L、L180M、A180T,以M/V207I单碱基突变检出频率最高(83.33%);9例突变株阳性患者的耐药位点以2071检出次数最多,其次为2041;均为多重耐药,最常见的耐药形式为LAM+LdT耐药;野生型患者与突变型患者在肝功能检测指标、HBV-DNA拷贝数和乙肝血清标志物三者之间不存在有差异。[结论]高通量测序能对HBV耐药基因型及突变位点提供定量结果,直观分析耐药情况;高通量测序在突变率<5%时即能检出突变位点,对突变频率要求低,可测出更多突变位点,对潜在耐药位点的发现有重要意义,具有实用的临床应用价值,并能监测患者治疗过程中潜在耐药位点的动态变化,有利于发现并监测新的耐药形式,对于实现临床个体化用药,制定个体化诊疗方案就显得尤为重要。