论文部分内容阅读
目的：探讨乙肝核心抗体（Hepatitis B core antibody,anti-HBc）阳性孕妇隐匿性乙型病毒感染（Occult hepatitis B infection,OBI）的临床特征，患病率和患者体内乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）突变情况。
方法：收集416名anti-HBc阳性且乙肝表面抗原（Hepatitis B surface antigen,HBsAg）阴性孕妇的血清。根据HBV序列，设计S区，X区和C区的引物。使用巢式PCR扩增孕妇血清中HBV的S区，X区和C区，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。根据巢式PCR结果确定OBI阳性孕妇。用化学发光微粒子免疫技术定量检测OBI孕妇血清中的HBsAg,乙肝表面抗体（Hepatitis B surface antibody，HBsAb）,乙肝e抗原（Hepatitis B e antigen，HBeAg）,乙肝e抗体（Hepatitis B e antibody，HBeAb）和anti-HBc。用超敏感HBV DNA检测试剂盒和普通HBV DNA检测试剂盒检测OBI孕妇血清中的HBV DNA载量。并且扩增OBI孕妇血清中HBV的S区，对扩增产物进行测序，并与参考序列进行比对，寻找S区突变位点，确定HBV基因型。根据测序结果使用MAGE X软件绘制系统进化树。
结果：在416名HBsAg阴性受试者中有63名检测到HBV DNA，anti-HBc阳性孕妇的OBI患病率为15.14％（63/416），95％置信区间：11.7％-18.58％。真阴性孕妇和OBI孕妇之间的主要临床特征和病毒学指标没有明显差异。所有孕妇血清中HBsAb的阳性率分别为87.74％（95％置信区间：84.59％-90.89％）。在OBI孕妇血清中，中位数HBsAb水平为215.35(28.18,662.18)mIU/ml，其中66.66％（42/63）的OBI孕妇血清中含有较高水平的HBsAb。只有11.1％（7/63）的OBI孕妇体内没有HBsAb（<10mIU/ml）。OBI孕妇血清中HBV DNA中位数水平为50.6（0，411）IU/ml，最高和最低HBV DNA载量分别为为36700IU/mL和0IU/mL。75％的OBI孕妇血清中病毒载量低于500IU/ml。通过基于超敏HBV DNA方法检测HBV DNA阳性检测率，显着高于基于普通HBV DNA方法检测HBV DNA的阳性率（58.73％vs31.75％，p<0.001）。测序结果表明，主要基因型是基因型B，占97.82％，基因型C尽占2.17％，但有14（30.43％）个基因型B发生了属于基因型C的氨基酸突变，提示部分OBI患者可能是HBV基因型B和基因型C的混合感染。其中I57F（19.57％），I150T（15.22％），C64R/P/Y（13.03％），S61P（10.87％）和T125M/A（10.87％）是本研究中突变发生频率较高的氨基酸突变位点。
结论：在anti-HBc阳性孕妇中OBI患病率大概为15.14％（95％置信区间：11.7％-18.58％）。大部分OBI患者血清中会存在HBsAb。具有更低检测下限的超敏HBV DNA检测方法更能检测出OBI血清中的HBV DNA。多种类型的突变体与少量野生型HBV共存，并相互作用以维持低病毒载量。突变可通过降低抗体与抗原的结合影响HBsAg检测。
方法：收集416名anti-HBc阳性且乙肝表面抗原（Hepatitis B surface antigen,HBsAg）阴性孕妇的血清。根据HBV序列，设计S区，X区和C区的引物。使用巢式PCR扩增孕妇血清中HBV的S区，X区和C区，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。根据巢式PCR结果确定OBI阳性孕妇。用化学发光微粒子免疫技术定量检测OBI孕妇血清中的HBsAg,乙肝表面抗体（Hepatitis B surface antibody，HBsAb）,乙肝e抗原（Hepatitis B e antigen，HBeAg）,乙肝e抗体（Hepatitis B e antibody，HBeAb）和anti-HBc。用超敏感HBV DNA检测试剂盒和普通HBV DNA检测试剂盒检测OBI孕妇血清中的HBV DNA载量。并且扩增OBI孕妇血清中HBV的S区，对扩增产物进行测序，并与参考序列进行比对，寻找S区突变位点，确定HBV基因型。根据测序结果使用MAGE X软件绘制系统进化树。
结果：在416名HBsAg阴性受试者中有63名检测到HBV DNA，anti-HBc阳性孕妇的OBI患病率为15.14％（63/416），95％置信区间：11.7％-18.58％。真阴性孕妇和OBI孕妇之间的主要临床特征和病毒学指标没有明显差异。所有孕妇血清中HBsAb的阳性率分别为87.74％（95％置信区间：84.59％-90.89％）。在OBI孕妇血清中，中位数HBsAb水平为215.35(28.18,662.18)mIU/ml，其中66.66％（42/63）的OBI孕妇血清中含有较高水平的HBsAb。只有11.1％（7/63）的OBI孕妇体内没有HBsAb（<10mIU/ml）。OBI孕妇血清中HBV DNA中位数水平为50.6（0，411）IU/ml，最高和最低HBV DNA载量分别为为36700IU/mL和0IU/mL。75％的OBI孕妇血清中病毒载量低于500IU/ml。通过基于超敏HBV DNA方法检测HBV DNA阳性检测率，显着高于基于普通HBV DNA方法检测HBV DNA的阳性率（58.73％vs31.75％，p<0.001）。测序结果表明，主要基因型是基因型B，占97.82％，基因型C尽占2.17％，但有14（30.43％）个基因型B发生了属于基因型C的氨基酸突变，提示部分OBI患者可能是HBV基因型B和基因型C的混合感染。其中I57F（19.57％），I150T（15.22％），C64R/P/Y（13.03％），S61P（10.87％）和T125M/A（10.87％）是本研究中突变发生频率较高的氨基酸突变位点。
结论：在anti-HBc阳性孕妇中OBI患病率大概为15.14％（95％置信区间：11.7％-18.58％）。大部分OBI患者血清中会存在HBsAb。具有更低检测下限的超敏HBV DNA检测方法更能检测出OBI血清中的HBV DNA。多种类型的突变体与少量野生型HBV共存，并相互作用以维持低病毒载量。突变可通过降低抗体与抗原的结合影响HBsAg检测。