论文部分内容阅读
【目的】检测3株乳腺癌细胞系中PD-L1分子的表达水平,并分析其诱导活化的PBMCs分化为Tregs的功能,分别研究Foxp3和TOPK在乳腺癌中的表达和临床意义。【方法】应用免疫组织化学染色方法(IHC)和蛋白质免疫印迹(WB)检测PD-L1、Foxp3、PD-1和TOPK在乳腺癌组织和细胞系中的表达。利用密度梯度离心法从人外周血中提取外周血单个核细胞(PBMCs)。通过双信号刺激激活PBMCs,再将活化的PBMCs在体外与乳腺癌细胞共培养,通过免疫荧光染色标记目的细胞,再应用流式细胞术检测目的细胞的百分比;最后利用SPSS20,通过t检验、卡方检验、单因素方差分析、SNK检验来分析实验数据。【结果】1.在MDA-MB-231、SK-BR3、BT474这三种乳腺癌细胞系中,只有三阴性细胞系MDA-MB-231检测到了PD-L1的表达,相对表达量为0.84;在20例乳腺癌组织中,PD-L1在不同分子分型的乳腺癌组织中表达水平不同(P=0.007),在三阴性乳腺癌组织中表达最高,平均相对表达量为1.32,在Luminal A、Luminal B、HER2+这三种类型乳腺癌组织中表达较低,平均相对表达量分别为0.66、0.77、0.80。2.Foxp3在乳腺癌组织中主要表达在肿瘤浸润性淋巴细胞上,表现为核表达,他在四种不同分子分型的乳腺癌中表达水平有差异(P<0.001),在三阴性乳腺癌组织中表达最高,平均相对表达量为1.56,在Luminal A、Luminal B、HER2+这三种类型乳腺癌组织中表达较低,平均相对表达量分别为0.77、0.82、0.91。3.乳腺癌细胞与活化的PBMCs的体外共培养实验结果表明,高表达PD-L1的231细胞可以协同TGF-β诱导PBMCs分化为Tregs,而不表达PD-L1的SK-BR3则没有这种作用4、在所检测的乳腺癌细胞中,TOPK在三阴性细胞系MDA-MB-231的相对表达量为1.37,在HER2+细胞系SK-BR3和HCC1954中的相对表达量分别为:1.01、1.03,在Luminal型细胞系MCF-7、T47D、BT474中相对表达量分别为0.64、0.58、0.5。TOPK在乳腺癌组织中主要表现为胞质表达;在所检测的40例乳腺癌组织中,都有TOPK的表达,其中35%的乳腺癌组织高表达TOPK;TOPK的表达与Ki67的表达(P<0.001)、乳腺癌组织分级(P=0.003)、ER/PR表达(P<0.001)和分子分型(P<0.001)有关,TOPK的表达与肿瘤大小(P=0.061)、淋巴结转移(P=0.681)和组织浸润(P=0.809)等病理参数没有关系。【结论】在所检测的乳腺癌细胞系中,PD-L1在三阴性细胞系MDA-MB-231中的表达最高,在所检测到乳腺癌组织中PD-L1和Foxp3都在三阴性乳腺癌组织中表达最高,PD-L1可能作为协同TGF-β诱导PBMCs分化为Tregs的因素之一,发挥抗肿瘤免疫的作用,Foxp3有可能成为治疗三阴性乳腺癌的靶向分子。TOPK在三阴性乳腺癌细胞和组织中表达最高,在乳腺癌组织中TOPK的表达水平与Ki67呈显著地正相关,高TOPK的表达似乎特异性的存在HER2+型和三阴性乳腺癌中,TOPK有可能成为预测乳腺癌预后的相关因子并且成为三阴性乳腺癌和HER2+型乳腺癌的一个新的治疗靶点,TOPK在乳腺癌中的作用机制,以及其与Ki67的关系需要进一步在乳腺癌细胞系中进行探索。