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本试验研究了TCM199中放线菌酮(CHX)和eCG/hCG预处理,对于初情期前后猪卵母细胞减数分裂进程和电激活后原核形成的影响,以便优化放线菌酮预处理的体外培养体系。试验内容包括:1)无eCG/hCG预处理对初情期前后猪卵母细胞减数分裂进程的影响;2)CHX对初情期前后猪卵母细胞减数分裂和孤雌后原核形成的影响;3)CHX与eCG/hCG结合对初情期前后猪卵母细胞减数分裂和孤雌后原核形成的影响。
试验证明:无eCG/hCG预处理12h后,两种卵巢来源的卵母细胞在两种成熟液中GVBD发生率差异均不显著(p>0.05)。成熟培养结束后,M199+eCG/hCG预处理的初情期后组COCs成熟率为78.6%±2.7%,显著高于初情期前组(55.2%±5.2%)和M199预处理的初情期后组(60.6%±1.7%)(p<0.05)。而无eCG/hCG处理组中,初情期前组和初情期后组成熟率差异不显著(60.6%±1.7%VS 58.8%±3.5%,p>0.05)。
两种卵巢的COCs经过5μg/ml CHX处理12h能完全抑制GVBD的发生,与Oh对照相比GVBD的发生率差异不显著(p>0.05),与M199组相比差异显著(55.4%±7.1%vs 8.4%±5.1%;45.5%±5.1%vs 9.7%±4.3%,p<0.05)。32h后M199+CHX预处理组中初情期后组成熟率显著高于初情期前组成熟率(66.1%±1.4%vs 58.8%±0.7%,p<0.05),并且显著高于M199组中初情期后组成熟率(66.1%±1.4%vs 55.3%±3.6%,p<0.05)。电激活后M199+CHX预处理组卵母细胞激活率均低于相应M199组卵母细胞,但是差异不显著(p>0.05)。
两种卵巢抽取的COCs经过M199+eCG/haCG+CHX组处理12h,GVBD的发生能够被完全抑制。与Oh对照相比GVBD的发生率差异不显著(p>0.05),与M199+eCG/hCG组相比差异显著(1.5%±0.8%vs 27.2%±8.4%;3.3%±0.6%vs37.7%±2.9%,p<0.05)。体外成熟后,M199+eCG/hCG预处理组中初情期后组COCs成熟率显著高于初情期前组(78.3%±3.0%vs 54.8%±4.8%,p<0.05)。而M199+eCG/hCG+CHX预处理组中初情期前组成熟率与初情期后组成熟率相比差异不显著(68.3%±3.4%vs 70.1%±3.2%,p>0.05)。M199+eCG/hCG预处理组初情期前组COCs成熟率显著低于M199+eCG/hCG+CHX预处理组中初情期前组成熟率(54.8%±4.8%VS 68.3%±3.4%,p<0.05)。电激活后M199+eCG/hCG预处理组卵母细胞激活率与M199+eCG/hCG+CHX组激活率差异不显著(p>0.05)。M199+eCG/hCG组内和M199+eCG/hCG+CHX预处理组内,初情期前组和初情期后组激活率差异也不显著(p>0.05)。