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目的:克隆并表达结核分枝杆菌重组融合蛋白TB10.4-Hsp16.3，分析其诊断结核病的价值;并建立基于重组融合蛋白TB10.4-Hsp16.3诊断结核病的纳米金生物传感器，为结核病的血清学诊断提供新的实验依据和技术支持。 方法:(1)根据GenBank中结核分枝杆菌TB10.4、Hsp16.3的基因序列设计并合成引物，以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模版，聚合酶链反应(PCR)扩增TB10.4和Hsp16.3的基因片段，重叠延伸PCR技术扩增融合基因TB10.4-Hsp16.3，克隆至pMD18-T载体，菌落PCR和测序鉴定，将序列正确的融合基因TB10.4-Hsp16.3亚克隆至表达载体pET28a(+)，PCR和双酶切鉴定阳性重组子。(2)将重组DNA转化E.coli BL21，筛选阳性菌株，异丙基β-D-硫代半乳糖苷诱导表达融合蛋白TB10.4-Hsp16.3，超声裂解菌体，对包涵体进行变性溶解和复性，His-bindTM柱层析(Ni2+-NTA)纯化重组融合蛋白TB10.4-Hsp16.3，Western blot分析其免疫学活性，ELISA评价其诊断结核病的价值。(3)品种成长法制备金纳米棒，经MUA、EDC、NHS化学修饰后，与融合蛋白TB10.4-Hsp16.3连接，构建纳米金生物传感器，评价其对结核病的诊断价值。 结果:(1)成功获得约750bp的融合基因TB10.4-Hsp16.3，构建了融合蛋白的重组表达质粒pET-TB10.4-Hsp16.3。(2)表达、纯化获得分子量约29kDa的融合蛋白TB10.4-Hsp16.3，能被结核病患者血清特异识别;其ELISA诊断结核病的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、诊断效率依次为89.3％、90.7％、90.9％、89.1％、90.0％。(3)构建了基于融合蛋白TB10.4-Hsp16.3的纳米金生物传感器，其诊断结核病的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、诊断效率分别为83.9％、85.2％、85.5％、83.6％、84.5％。 结论:(1)采用重组DNA技术获得了结核分枝杆菌重组融合蛋白TB10.4-Hsp16.3。(2)融合蛋白TB10.4-Hsp16.3具有良好的免疫活性，可用于结核病的诊断。(3)基于融合蛋白TB10.4-Hsp16.3的纳米金生物传感器对结核病具有较好的诊断价值。