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热应激状态下蛋鸡生理机能紊乱,生产性能下降,甚至死亡。由于热应激给蛋鸡养殖业带来严重的经济损失,因此研发防治蛋鸡热应激的药物具有广阔的经济前景。近年研究中药抗蛋鸡热应激的文献报道较多,但中药对热应激蛋鸡心功能的影响的研究目前尚未见有报道。
本试验选用60周龄海兰白蛋鸡350只,随机分为7个处理组,试验1～4组分别在日粮中添加1％的中药复方1、中药复方2、中药复方3和紫锥菊,试验5组添加0.1%的电解多维,试验6组和7组只饲喂基础日粮。1～6组为高温试验组,7组为常温对照组。在试验期的第14d、28d、42d、56d采样,观察各试验组蛋鸡血清心肌酶活力、心脏组织结构、心脏抗氧化性能及HSP70表达的变化,探索中药对热应激蛋鸡心功能的影响及其作用机制。
1.血清心肌酶检测结果显示,与常温对照组比较,各热应激试验组血清CK和AST活性均升高,但用药组蛋鸡血清CK和AST活性均低于高温对照组,其中复方2、3组与高温对组呈显著差异(P＜0.05)。高温对照组血清LDH活性显著降低常温对照组(P＜0.05),各用药组LDH性与常温对照组差异不显著。
2.病理组织学检测结果显示,高温对照组蛋鸡心脏出现心肌变性、坏死和心肌纤维断裂等病理变化,并随着热应激时间持续心脏病变程度日益加重。复方1组和对照药物组心肌病变以心肌肿胀为主。复方2、3组蛋鸡心脏发生心肌肿胀和心肌纤维断裂,随后心脏病变程度减轻。紫锥菊组蛋鸡心脏发生较严重的病变。
3.心脏抗氧化性能检测结果显示,与常温对照组比较,各热应激试验组蛋鸡心脏MDA含量上升,但用药组蛋鸡MDA含量均低于高温对照组(P＜0.05),其中紫锥菊下降的幅度最大。高温对照组组SOD活力和GSH-PX活力显著降低常温对照组(P＜0.05),各用药组蛋鸡心脏SOD活力和GSH-PX活力均显著高于高温对照组(P＜0.05),其中紫锥菊组升高幅度最大。
4.HSP70的定量检测结果显示,实验前期各热应激试验组(除紫锥菊组外)蛋鸡心脏HSP70表达量均高于常温对照组,其中高温对照组升高的幅度最大。随后高温对照组、复方1组、对照药物组蛋鸡心脏HSP70表达量不断上升,复方2、3组蛋鸡心脏HSP70表达量下降。紫锥菊组蛋鸡蛋HSP70表达量在实验0～42d时未见升高,实验56d时突然大幅度升高。
5.RT-PCR.定量检测结果显示,与常温对照组比较,各热应激试验组蛋鸡心脏HSP70mRNA表达水平显著升高(P＜0.05),但各用药组升高幅度均低于高温对照组。紫锥菊组和高温对照组蛋鸡HSC70mRNA表达水平呈先降后升波动性变化,其它热应激试验组HSC70mRNA表达水平极显著提高(P＜0.01)。
6.免疫组织化学检测结果显示,与常温对照组比较,各热应激试验组蛋鸡心肌细胞HSP70阳性表达强度增加。高温对照组和紫锥菊组蛋鸡心脏HSP70首先广泛分布于心肌纤维,随后向细胞核内转移,最后整个心肌细胞均见HSP70强阳性表达。各复方中药组蛋鸡心脏HSP70分布规律基本一致:实验前期心肌细胞的细胞核出现HSP70强阳性表达,实验后期HSP70主要分布于心肌纤维中。
本研究结果表明,各中药复方和紫锥菊可缓解热应激所致的心肌损伤,其中复方2和复方3的作用较好,紫锥菊的作用较弱。中药能够提高蛋鸡心脏的抗氧化性能,减轻心脏自由基损伤程度,其中紫锥菊的抗氧化效果最明显。复方1够减缓热应激下HSP70和HSP70mRNA表达水平升高的速度,复方2、3则可降低HSP70和HSP70mRNA表达,紫锥菊可能抑制HSP70表达;各中药复方能够迅速提高HSC70mRNA表达水平,以维持HSC70mRNA的生理功能;各复方中药可促进HSP70向核内转移。上述结果提示,适当提高心脏抗氧化性能和调控HSP70表达可能是中药抗热应激的重要作用机制。