AE--624对阿尔茨海默病小鼠模型的脑保护作用及机制研究

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:DrunkenLion
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目的:探究AE-624对阿尔茨海默病小鼠模型(东莨菪碱致痴呆模型及SAMP8快速老化模型)学习记忆行为的影响,对阿尔茨海默病模型小鼠神经递质、免疫功能及突触相关蛋白通路的影响,阐明AE-624的脑保护作用及其作用机制。方法:1)东莨菪碱致记忆障碍模型中,将72只雄性KM小鼠随机分为6组:空白组、模型组、多奈哌齐(Donepezil)阳性组、AE-624低、中、高剂量组(30,60,120 mg·kg-1·d-1),每组12只,连续灌胃(ig)给药10d。通过腹腔注射氢溴酸东莨菪碱(2 mg·kg-1)获得记忆障碍的小鼠模型,Morris水迷宫实验和跳台实验测定小鼠空间和被动学习记忆能力,以及ELISA检测小鼠血清、海马和皮层中ACh、ChAT含量及AChE活力;2)SAMP8快速老化模型中,将6月龄快速老化SAMP8小鼠及同龄匀速老化的SAMR1小鼠作为正常对照,建立正常组,SAMP8模型组,美金刚(Memantine)阳性组,AE-624低、中、高剂量组(30,60,120 mg·kg-1·d-1),每组动物12只每周进行一次老化评分,连续灌胃(ig)给药75d后,通过Morris水迷宫实验及自主活动实验测定SAMP8快速老化小鼠空间学习记忆功能及情绪状态,以及ELISA检测小鼠血浆中ACh、5-HT、NE、DA、COX-2、ROS、NMDAR等神经递质及受体的含量。采用流式细胞仪检测CD3+CD4+及CD3+CD8+T淋巴细胞亚群的分布情况,以及检测IL-10,IL-17A,TNF,IFN-γ,IL-6,IL-4,IL-2等免疫因子的表达。同时通过WesternBlot检验海马神经元突触可塑性相关蛋白(Doublecortin,DCX)、SYN、PSD95、Drebrin的表达。结果:1)东莨菪碱模型实验中,AE-624各剂量组均显著延长了小鼠水迷宫逃避潜伏期(P<0.01),增加小鼠穿环次数,优化小鼠在水迷宫中上台的探索模式,显著延长小鼠在跳台实验中的下台潜伏期(P<0.01),减少小鼠的跳台错误次数(P<0.01),以及显著升高小鼠血清、海马和皮层中ChAT酶及ACh的含量(P<0.01),抑制脑组织中AChE酶活力;2)SAMP8快速老化模型实验中,老化评分结果表明:各组动物随给药周期的增加,各组小鼠的老化评分分值均增加,老化程度越发严重,AE-624能显著降低SAMP8小鼠老化评分分值。AE-624能明显提升SAMP8老化小鼠的水迷宫成绩,增加矿场箱体中的自主活动次数,提示着AE-624具有改善SAMP8老化小鼠空间学习记忆和调节动物焦虑抑郁情绪的作用。生化指标检测结果显示:AE-624能显著抑制SAMP8模型血浆中AChE酶活力,上调ACh含量,AE-624亦能够提升单胺类神经递质5-HT及NE的含量。同时,AE-624可以有效抑制血浆中谷氨酸能NMDAR和影响线粒体细胞呼吸有关的ROS含量,且AE-624低、中剂量组能够显著降低血浆中炎症反应的重要生物学指标COX-2活性,(P<0.05)。流式细胞仪测定结果显示:模型组及其它用药组SAMP8小鼠血浆中辅助性CD3+CD4+细胞明显低于正常组(P<0.01),而杀伤性CD3+CD8+显著升高(P<0.01),说明模型组P8鼠较正常组R1鼠的免疫力较低下或呈免疫缺陷状态。AE-624可以抑制小鼠体内CD3+CD8+淋巴细胞的显著增加,促进脾脏中CD3+CD4淋巴细胞的生成(P<0.05,P<0.01)。免疫因子检测结果表明:模型组小鼠血浆中除了IL-6浓度显著高于正常组之外(P<0.05),其余6种细胞因子均呈现显著降低的趋势(P<0.01);AE-624(低,中,高)各剂量组也能够抑制IL-17A,TNF,IL-6的表达(P<0.05,P<0.01),其中低,高剂量组能够显著抑制小鼠血浆中IL-4的表达(P<0.05,P<0.01),高剂量组亦能有效抑制IL-2的表达(P<0.01)。蛋白免疫印迹实验结果显示:AE-624能显著提升SAMP8小鼠海马中DCX、SYN、PSD95及Drebrin的表达(P<0.01)。结论:AE-624能显著提升东莨菪碱模型小鼠及SAMP8模型小鼠的学习记忆能力,提升小鼠体内ChAT酶含量,抑制AChE酶活力,促进ACh的生成,增强胆碱能作用。AE-624能有效提升单胺类神经递质含量,优化保持小鼠学习记忆能力,调节小鼠紧张焦虑恐慌的情绪。AE-624能调节SAMP8模型小鼠随加龄诱发的CD3+CD4+辅助性淋巴细胞数量降低,抑制CD3+CD8+杀伤性淋巴细胞数量相对升高,提升CD3+CD4+/CD3+CD8+的比值从而改善SAMP8老化小鼠的免疫功能障碍。AE-624可以调节SAMP8老化鼠体内Th1/Th2细胞因子的平衡,同时能够降低促炎因子TNF、IL-17A提升抑炎因子IL-10的表达,使得机体处于抗原负荷逐步控制的环境中,延缓衰老提高机体免疫力。AE-624亦能有效抑制血浆中谷氨酸能NMDAR和影响线粒体细胞呼吸的ROS的含量,有效提升SAMP8小鼠海马中突触性相关蛋白的表达,发挥神经保护作用,改善记忆认知功能。
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