M1/M2型炎症环境对小鼠脊髓神经干细胞分化的影响

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损伤脊髓后的内环境不足以支持NSC向神经元方向分化,从而无法补充因损伤所失去的神经元。不同于脑中的NSC主要存在于侧脑室下区(subventricular zone,SVZ)和海马齿状回的颗粒下区(Subgranular zone,SGZ),脊髓中的NSC主要位于脊髓中央管室管膜区。脊髓损伤后,大部分的NSC分化成星形胶质细胞,形成胶质瘢痕,抑制神经轴突的生长,不利于脊髓损伤后的功能恢复。炎症反应过程是脊髓损伤后最为重要的病理过程之一,巨噬/小胶质细胞是脊髓损伤后的最重要的炎症细胞,主要决定着SCI的内环境。SCI后巨噬/小胶质细胞活化后可分为M1和M2两个功能不同的亚群,M1细胞通过释放促炎因子、自由基等造成神经元和胶质细胞的毒性;而M2细胞可通过分泌抑炎因子减少对正常组织的损伤。不同的免疫炎症环境可能影响着脊髓损伤的预后。那么SCI后引发的局部炎症是否直接影响着脊髓内源性NSC的分化方向?因此本实验从SCI后的炎症反应入手,在体外探讨不同的免疫炎症环境对体外培养的脊髓NSC分化的影响,从而为促进体内NSC的神经元方向分化寻找策略。我们首先给予体外培养的小鼠骨髓巨噬细胞、N9小胶质细胞和脊髓原代培养的小胶质细胞极化刺激,通过qPCR和Westernblot分别检测M1/M2细胞特异性基因的表达,观察它们向M1和M2方向极化的情况,并获得M1和M2细胞的条件性培养基;体外培养脊髓NSC,随后分别联合M1/M2细胞的条件性培养基,通过免疫组织化学染色、qPCR和Westernblot方法,观察脊髓NSC在不同炎症环境中的分化方向。通过以上实验目前我们得到如下结果:体外培养的骨髓巨噬细胞、N9小胶质细胞以及脊髓原代小胶质细胞在“经典活化”途径刺激24h后,均能向M1方向极化。在M1型巨噬细胞的炎症环境中,脊髓干细胞主要向星形胶质细胞分化。而在M2细胞的炎症环境中,与对照组及M1型巨噬细胞的炎症环境相比,脊髓干细胞向神经元和少突胶质细胞方向分化的数量增多。本研究结果提示:在M1型炎症环境中,脊髓NSC主要向星形胶质细胞方向分化;而M2型炎症环境,利于脊髓NSC向神经元和少突胶质细胞方向分化。
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