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槐糖脂(Sophorolipids)作为一种胞外糖脂类表面活性剂,主要应用于食品、化妆品、洗涤剂、医药和环境保护等方面。槐糖脂是由酵母发酵后以混合物存在的一种物质,分为酸型和内酯型,二者结构的不同造成其生物学活性和理化特性的不同。内酯型槐糖脂(lactonic sophorolipids,L-SLs)具有较好的抗菌,抗癌活性,主要应用于医药领域;酸型槐糖脂(acidic sophorolipids,A-SLs)具有较强的产泡效果,乳化能力和溶解性,广泛应用于石油污染的重新修复、生物降解、污染物的清除、皮肤保湿、食品加工和洗涤剂等方面。因此,有必要研究哪些因素影响发酵产物中内酯型槐糖脂和酸性槐糖脂的比例,为选择性生产槐糖脂奠定基础。迄今为止,决定内酯型与酸型槐糖脂比例的因素尚不明确。金属离子对槐糖脂的产量和组成的研究极少。因此,有必要研究不同的金属离子对槐糖脂产量及结构组成的影响,进一步研究其调控机理,这将对槐糖脂产量的提高,对未来选择性生产特定结构的槐糖脂具有指导意义。本文主要的研究内容及其结果总结如下:1.研究了Mg2+、Fe2+、Cu2+、Mn2+、Ni2+、Co2+、Fe3+、Zn2+对拟威克酵母生长状况和槐糖脂产量的影响。加入不同的金属离子,pH受影响较小,仍维持在2.5-3.0左右。生物量有所降低,加入不同金属离子生物量降低的程度不同,加入Fe2+后生物量受影响最大。总槐糖脂的产量随着加入金属离子的种类不同而不同,当加入Ni2+、Mn2+或Cu2+时,槐糖脂的总产量大于100g/L。尤其是加入Cu2+,槐糖脂的总产量达到149.90g/L。但是,当仅加入Fe2+时,总槐糖脂的产量只有41.35g/L。当加入Mg2+、 Zn2+、 Fe3+或Co2+时,总槐糖脂的产量在80g/L左右。内酯型槐糖脂与总槐糖脂的比值从71.75%(Mg2+)降低位15.36%(Fe2+),L-SLs与A-SLs的比例从2.54降到0.39。Fe2+有利于酸型槐糖脂的合成,Mg2+有利于内酯型槐糖脂的合成。2.利用色谱技术TLC、IR spectra、HPLC、HPLC-MS对添加Mg2+、Fe2+、Cu2+后发酵所得槐糖脂进行结构分析。在基础培养基中,并比较添加不同金属离子后所产槐糖脂结构的差异。结果显示,所得槐糖脂粗品中都含有20多种不同结构的槐糖脂。分别添加Mg2+和Fe2+发酵所得两种槐糖脂粗品中每个峰的保留时间相同,但是特定峰的峰面积显著不同,特别是在保留时间分别为21.26min,34.30min和38.66min时出现的峰。表明了,Mg2+和Fe2+的添加改变了酸型槐糖脂与内酯型槐糖脂占总槐糖脂的比例。对添加Cu2+发酵所得槐糖脂结构进行分析,得到的槐糖脂分子的脂肪酸部分均含16或18个碳原子。其中,编号为1-5的峰为酸型槐糖脂分子,6-10为内酯型槐糖脂分子,编号1-10中包括11种槐糖脂分子,其中包括5种酸型槐糖脂,6种内酯型槐糖脂。3.不同金属离子对拟威克酵母槐糖脂合成调控机理的研究。首先,研究了两种金属离子对槐糖脂产量及组成的影响。其次,利用SDS-PAGE研究不同金属离子发酵所得胞外蛋白及胞内蛋白的差异。SDS-PAGE结果显示,添加Mg2+、Fe2+与Cu2+发酵后的胞外蛋白明显不同,其分子量分别为48.3、44.4、29.0、24.8和15.8kDa有明显差异,而胞内蛋白并无差异。最后,研究了酸型槐糖脂在胞外酶作用下的转化效果,实验结果表明:酸型槐糖脂部分转化为内酯型槐糖脂,使用添加MgSO47H2O所得胞外酶液转化的内酯型槐糖脂相对于添加FeSO4H2O条件下酶液更多,表明Fe2+可能抑制了某些内脂化酶的合成。