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目的:急性肺损伤(ALI)是一种可危及生命的以肺泡上皮损伤为特征的临床综合症，最终发展为肺水肿。目前ALI/ARDS的发病机制尚未完全阐明。以前人们认为，肺水清除的主要动力是钠离子跨上皮转运。上皮钠离子通道(ENaC)的表达和活性降低被认为与肺水肿进展有关。现今的研究发现在肾和肺缺血再灌注损伤模型中，消退素D1(RvD1)已表现出有效的抗炎和促消退作用。但是消退素D1对肺水肿的影响缺乏研究。为此，本研究选择A549细胞株建立脂多糖(LPS)引起的急性肺损伤模型，并探讨消退素D1(RvD1)对脂多糖攻击A549细胞株钠离子通道α，γ亚基的影响。
方法:
1.分别用0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml的脂多糖(LPS)刺激A549细胞株，并利用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测在刺激12h后A549细胞株上α-ENaC和γ-ENaC的蛋白表达;用1μg/ml的脂多糖(LPS)刺激A549细胞株，并利用免疫蛋白印迹法检测在刺激6h、12h、24h、48h后A549细胞株上α-ENaC和γ-ENaC的蛋白表达，从而摸索出内毒素性肺损伤细胞模型中最适的脂多糖浓度和刺激时间。
2.将细胞随机分为三组:①组为空白组:无血清的培养基不含任何药物;②LPS组:无血清的培养基中加入1μg/ml LPS;③组为LPS+RvD1组:无血清培养基中加入1μg/ml LPS+1×10-7mol/ml RvD1。
3.药物刺激12h后用免疫蛋白印迹法和免疫组织化学方法(IHC)分别检测A549细胞株上α-ENaC和γ-ENaC的蛋白表达。试验重复3次。
5.所有数据以均数±标准差（(x)±s）表示，GraphPad Prism5软件进行分析处理，所有数据用单因素方差分析(one-way ANOVA)和Student-Newman-Keuls posthoc检验进行组间比较。P＜0.05为差异有统计学意义。
结果:
1.脂多糖引起的急性肺损伤模型的建立免疫蛋白印迹检测结果显示:0.5μg/ml，1μg/ml，2μg/ml和5μg/ml LPS作用A549细胞12h后，低剂量组（无血清培养液中加入1μg/ml LPS）的α-ENaC和γ-ENaC蛋白表达与空白对照组相比显著下降;1μg/ml LPS作用A549细胞6h，12h，24 h和48 h后，6h组和12h组的α-ENaC和γ-ENaC蛋白表达与空白对照组相比有显著下降。
2.免疫蛋白印迹检测结果显示:空白对照组α-ENaC和γ-ENaC蛋白有表达，LPS组的α-ENaC和γ-ENaC蛋白表达较空白对照组明显降低(P＜0.05);与LPS组相比，LPS+RvD1组α-ENaC和γ-ENaC蛋白的表达显著增高(P＜0.05)。
3.免疫组织化学检测结果显示:空白对照组，LPS组和LPS+RvD1组细胞的α-ENaC和γ-ENaC均呈阳性染色，细胞膜上及胞浆内呈棕褐色，阴性对照组无阳性染色。
结论:
1.用1μg/ml脂多糖刺激A549细胞12h能建立较为合理的内毒素性肺损伤细胞模型;
2.A549细胞上表达有α-ENaC和γ-ENaC蛋白，RvD1能促进脂多糖攻击的A549细胞上α-ENaC和γ-ENaC蛋白表达上调。