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紫杉醇(PTX)是一种治疗乳腺癌、卵巢癌和肺癌等多种癌症的广谱抗癌药物,临床疗效显著。但是,紫杉醇具有很强的亲脂性,其生物利用度低,半衰期短,具有严重的毒副作用,例如心血管毒性和肾毒性等,这些缺点严重限制了其临床应用。玉米醇溶蛋白(Zein)是玉米胚中的主要蛋白质,具有特殊的溶解性和良好的生物相容性、生物降解性,能够自组装成纳米粒,已广泛作为药物载体使用,但其作为抗肿瘤药物载体的稳定性和靶向性等都有待提高。目的:选用PTX作为目标药物,Zein作为药物载体,首先制备紫杉醇/玉米醇溶蛋白纳米粒(Zein-PTX NPs),然后采用p H敏感性的聚多巴胺(PDA)涂层来增强Zein的稳定性和肿瘤靶向性,最后通过共价结合在PDA修饰的Zein-PTX NPs(Zein-PTX@PDA NPs)表面连接叶酸(FA)靶向配体,制备一种新型的兼有主动靶向、被动靶向和物理化学靶向(p H敏感性)的纳米粒(Zein-PTX@PDA-FA NPs),以期平衡PTX的油水分配,提高生物利用度、延长体内循环时间、减轻毒副作用,增强靶向能力。方法:通过相分离法制备出Zein-PTX NPs、Zein-PTX@PDA NPs和Zein-PTX@PDA-FA NPs,以单因素和正交试验优化处方,然后通过粒径、电位、透射电镜(TEM)、差示扫描量热仪(DSC)、X射线衍射(XRD)、红外光谱(FTIR)、X射线光电子能谱(XPS)和体外释放等来研究纳米粒的理化性质和确认结构。采用CCK-8法进行细胞毒性实验,初步评价纳米粒对Hela细胞和4T1细胞的抑制作用,并以PTX原料药和紫杉醇市售注射液(PTX injection)为阳性对照药。体外摄取实验以香豆素-6(C6)代替PTX进行纳米粒定性和定量摄取分析。以PTX injection作为参比制剂,通过尾静脉给药评估其和Zein-PTX NPs和Zein-PTX@PDA-FA NPs的药代动力学行为特征;最后,对PTX injection、Zein-PTX NPs和Zein-PTX@PDA-FA NPs在大鼠心、肝、脾、肺、肾组织的分布情况进行评价,研究其靶向效率。结果:Zein-PTX NPs的平均粒径为(278.95±2.12)nm,Zeta电位为(-36.44±1.17)m V,包封率为(92.26±1.30)%,载药量为(20.06±0.28)%。Zein-PTX@PDA NPs的平均粒径为(312.24±1.28)nm,Zeta电位为(-40.85±1.37)m V,包封率为(97.18±1.22)%,载药量为(18.00±0.23)%;Zein-PTX@PDA-FA NPs的平均粒径为(380.73±1.33)nm,Zeta电位为(-45.32±1.35)m V,包封率为(97.93±1.34)%,载药量为(10.42±0.15)%。TEM结果表明制备的Zein-PTX NPs呈球形,粒子之间无粘连,Zein-PTX@PDA NPs和Zein-PTX@PDA-FA NPs有明显的层状结构,表面粗糙。DSC和XRD结果显示,PTX主要以晶型结构存在于纳米粒中。FTIR和XPS结果证明了PDA和FA的成功修饰。体外释放结果说明,在中性条件下,相对于PTX原料药,Zein-PTX NPs和Zein-PTX@PDA-FA NPs均具有缓释作用,但是在弱酸性环境下,Zein-PTX@PDA-FA NPs释放加快,具有p H敏感性。CCK-8实验结果显示Zein-PTX@PDA-FA NPs具有增强的细胞毒性并显著降低PTX的IC50值,并且对于4T1细胞的抑制效果要大于Hela细胞。体外摄取实验发现,在高等表达和中等表达叶酸受体的细胞中,不管是定性还是定量,Zein-C6@PDA-FA NPs的特异性识别能力都显著高于Zein-C6 NPs和Zein-C6@PDA NPs,而在阴性表达叶酸受体的L929细胞中,纳米粒细胞摄取效率相互没有差异。通过在高表达叶酸受体的Hela细胞中加入游离FA预孵一段时间后发现,Zein-C6@PDA-FA NPs对靶细胞的特异识别能力被竞争性抑制。Zein-PTX@PDA-FA NPs体内药动学结果表明,与PTX injection相比,Zein-PTX NPs和Zein-PTX@PDA-FA NPs的t1/2分别延长了1.64倍和2.29倍,表观分布容积分别增加了1.77倍和3.03倍,延长了PTX在体内的作用时间;大鼠组织分布研究发现,与PTX injection相比,尾静脉给药后Zein-PTX NPs和Zein-PTX@PDA-FA NPs显著提高了PTX在肺、肝、脾组织的分布量,而在心脏、肾脏组织中PTX浓度明显降低,Zein-PTX@PDA-FA NPs在肺中的相对摄取率(Re)、靶向效率(Te)和峰浓度比(Ce)最高。结论:本论文成功制备了Zein-PTX NPs、Zein-PTX@PDA NPs和Zein-PTX@PDA-FA NPs,有较高的包封率和载药量。Zein-PTX@PDA-FA NPs具有p H敏感性。显著抑制癌细胞增殖能力,增加了细胞摄取能力和主动靶向性,延长了体内循环时间,并且能够快速地分布于肺、肝、脾组织中,能有效地降低心、肾毒性,增强了对于肺、肝、肾组织的靶向效率。Zein-PTX@PDA-FA NPs为开发PTX制剂提供了一定的科学实验基础并且具有应用于肿瘤临床治疗的研究意义。