驴绒毛膜促性腺激素(dCG)的分离与纯化及其生物活性的研究

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驴绒毛膜促性腺激素(dCG),是在怀孕母驴血清中发现的一种糖蛋白激素。此类激素在妊娠马属动物(马,斑马等)中都有产生。主要作用为促进卵泡发育,同时有一定的促排卵和黄体形成的功能;对雄性动物具有促使精细管发育和生殖细胞分化的功能。目前市面售卖的主要是马属动物绒毛膜促性腺激素(e CG),又名孕马血清(PMSG)。为了提高养驴效益,开发其产品,研究dCG作用于临床的可行性,本研究采集了不同年龄(4-7岁),不同怀孕天数(60天,90天,120天)的孕驴血清,并探索利用硫酸铵盐析与疏水作用层析结合法在dCG纯化中的作用;并将纯化后的dCG与市售的e CG利用4周龄昆明鼠作对比试验,进行超数排卵,分析dCG对小鼠促进卵泡发育的作用效果。结果表明:1.研究发现孕驴血清中的dCG含量与妊娠天数有关。妊娠90天时,dCG活性浓度均值为0.99 IU/mg,显著高于孕60天时的0.36 IU/mg和120天时的0.42 IU/mg。在妊娠90天时,5岁孕驴的比活均值最高,为2.47 IU/mg,而此时4岁、6岁、7岁孕驴的比活均值分别为0.55 IU/mg、0.38 IU/mg、0.27 IU/mg。2.采用硫酸铵对孕驴血清进行粗分离,当溶液为50%饱和硫酸铵时,约90%杂蛋白被沉淀,且活性损失小,蛋白回收率达88%,溶液比活提高了7.12倍;随后采用疏水作用层析对粗分离后的dCG进行纯化,比活由原样品的4.83 IU/mg提高到563.67IU/mg,溶液比活提高了117倍。3.在大鼠卵巢增重法实验中,dCG对卵巢增重效果显著。在小鼠超排实验中,dCG对KM鼠的超排效果与e CG接近,可以认为,本研究中纯化的dCG具有与市售的e CG相同的生物活性及作用能力,未来可以考虑在生产中推广。
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