柚苷酶催化固相底物反应的研究

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本文用实验室的黑曲霉菌株Aspergillus niger WZ001通过固态发酵制备柚苷酶,经初步提取得到柚苷酶酶粉,柚苷酶是由α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶组成的酶系。悬浮液中柚皮苷的酶催化反应中,反应20min时,生成柚皮素单糖苷浓度最高(352μg/ml)的条件是pH值4.5,温度50℃,生成柚皮素浓度最高(198μg/ml)的条件是pH值5.0,温度40℃。活性炭上柚皮苷的酶催化反应中,珠型活性炭最合适,在珠型活性炭上柚皮苷的酶催化反应中柚皮苷的浓度可以达到1%,反应20min时,生成柚皮素单糖苷浓度最高(831μg/ml)的条件是pH值5.0,温度45℃,生成柚皮素浓度最高(628μg/ml)的条件是pH值4.5,温度45℃。树脂上柚皮苷的酶催化反应中,大孔交换树脂CR115最合适,在CR115树脂上柚皮苷的酶催化反应中柚皮苷的浓度可以达到2%,反应20min时,生成柚皮素单糖苷浓度最高(2013μg/ml)的条件是pH值5.0,温度50℃,生成柚皮素浓度最高(1315μg/ml)的条件是pH值5.0,温度45℃。CR115树脂重复使用5次后,柚皮苷的相对吸附量、产物柚皮素单糖苷相对浓度和柚皮素相对浓度都超过90%,这表明CR115树脂能够重复利用。流速为2ml/min的30%乙醇溶液能够使柚苷酶催化产物柚皮素单糖苷和柚皮素实现较好的分离,得到柚皮素单糖苷和柚皮素的纯度分别为94.2%和96.7%。
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