【摘 要】
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我国首创的Vc两步发酵法是惟一应用于大规模生产实践的微生物转化法,其突出优势就是糖酸转化效率高,但需要两步发酵过程、三种微生物共同参与。应用基因工程技术将参与两步发
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我国首创的Vc两步发酵法是惟一应用于大规模生产实践的微生物转化法,其突出优势就是糖酸转化效率高,但需要两步发酵过程、三种微生物共同参与。应用基因工程技术将参与两步发酵的相关基因整合在单一宿主菌中表达,构建一步发酵工程菌,可望大幅度提高维生素C发酵生产的工艺水平。本实验室从小菌中分离得到了一个糖酸转化关键酶山梨糖脱氢酶的基因,但在大肠杆菌中表达的山梨糖脱氢酶并没有糖酸转化活性,推测是由于大肠杆菌中缺少山梨糖脱氢酶电子受体。小菌中的一种细胞色素C可能是其电子受体。本实验首先利用酵母双杂交系统和细菌双杂交系统研究了山梨糖脱氢酶与细胞色素C在啤酒酵母和大肠杆菌中的相互作用,结果显示在该水平上检测不到二者的相互作用。为了寻找山梨糖脱氢酶电子受体,我们构建了含山梨糖脱氢酶基因的重组黏粒pKC505-sdh,并利用该载体构建了小菌的基因文库,筛选得到1个能催化山梨酮脱氢的阳性克隆,通过亚克隆筛选得到了山梨酮脱氢酶的完整基因;同时得到2个能进行糖酸转化的阳性克隆,关于山梨糖脱氢酶电子受体及其基因的寻找正在进行中。
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