塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）属于小RNA病毒科（picornaviridae）塞内卡病毒属（Senecavirus）,是单股正链RNA病毒。SVA可引起猪原发性水疱病（porcine idiopathic vesicular disease,PIVD）,病猪口腔、蹄部、鼻镜等部位出现水疱症状,严重时可发生水疱破溃,口鼻部溃疡,蹄壳脱落导致跛行。此外,部分仔猪感染SVA会出现昏睡、腹泻等症状,7日龄以下仔猪死亡率可达30%。2015年至今,SVA疫情已在北美、南美、亚洲的多个国家出现,在我国的华南、华中、东北地区均有分布,对我国养猪业的发展形成了巨大的威胁。疫苗是控制疫情传播,保护易感动物的重要工具,但到目前为止,依然没有商品化的SVA疫苗出现。因此,尽快研制出新型疫苗对防控我国SVA疫情具有重要意义。传统的灭活疫苗和弱毒疫苗存在免疫效果不强或安全性不佳、运输不便等缺点,且很难应对病毒突变带来的问题。而病毒样颗粒（Virus-like Particles,VLPs）由病毒结构蛋白聚集形成,抗原表位丰富,不含病毒遗传信息,可由大肠杆菌表达系统在体外大量表达,是一种良好的无囊膜病毒疫苗抗原,具备安全、高效、低成本的优势。本研究利用大肠杆菌表达系统对SVA的部分结构蛋白进行表达,在体外环境下自组装形成VLPs,并对其进行免疫原性探究,以期为后续研究制备商品化SVA疫苗提供基础数据。具体研究内容如下:SVA病毒分离鉴定及基因组序列分析:从病猪组织样本中分离病毒,采用RT-PCR方法扩增其全基因组序列,将序列提交至Gen Bank,登录号为:MG428683,将新毒株命名为:CH-GDYD-2017。对近年来的SVA序列进行同源性分析和系统发育树分析,结果显示本株毒与国内CH-GDLZ-01-2017株、CH-01-2017株同源性最高。从系统发育树可以看出,国内SVA毒株与美国毒株处于同一进化分支,目前尚无完全独立进化的SVA毒株。以获得的CH-GDYD-2017全基因组为模版,运用RT-PCR扩增SVA的结构蛋白VP1、VP2、VP3基因;运用p ET-32a（+）质粒构建这3个基因的原核表达质粒,成功构建了p ET-32a（+）-VP1、p ET-32a（+）-VP2、p ET-32a（+）-VP3表达质粒。对VP1、VP2、VP3蛋白进行原核表达,对VP2蛋白进行可溶性表达,并对不可溶的VP1、VP3蛋白进行包涵体溶解、复性,恢复其可溶性。对蛋白进行过柱纯化,获得纯化程度高的可溶性蛋白,并经Western-Blot鉴定其确为纯化后的VP1、VP2、VP3蛋白将VP1、VP2、VP3蛋白在不同环境下自组装,运用透射电镜观察可见,在组装前蛋白浓度为0.5 mg/m L,0.05 M或0.01 M的PBS缓冲液环境下,VP1、VP2、VP3蛋白可自组装形成直径20～30 nm的病毒样颗粒形成,形态大小符合理论预期,说明VP1、VP2、VP3蛋白可在一定的组装环境下自组装形成病毒样颗粒。使用VLPs免疫小鼠并采集小鼠血清,运用间接ELISA方法检测小鼠血清抗体水平,发现其抗体水平在免疫VLPs后处于较高水平,说明组装的VLPs可刺激小鼠产生一定的体液免疫反应。对小鼠攻毒免疫保护实验的荧光定量PCR和免疫组织化学结果表明,VLPs免疫可以有效降低小鼠各组织的病毒载量。综上所述,本研究成功分离了一株新的SVA毒株CH-GDYD-2017（Gen Bank:MG428683）,分析了近年来SVA毒株的流行情况,为研究SVA流行病学提供了基础数据。成功实现了SVA结构蛋白VP1、VP2、VP3的可溶性表达,利用大肠杆菌表达系统实现了SVA在体外环境下的VLPs自组装,并对其免疫原性进行了检测,为后续研究以VLPs为抗原的SVA疫苗提供了基础数据。