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目的:超声靶向破坏微泡技术已经成为一种新型的基因或药物给药方法应用于肿瘤的治疗。但是,这种方法所介导的基因转染效率较低,较难满足实际应用的需求,为此,本研究介绍一种新的双靶向阳离子微泡(MBi RGD/CCR2),这种微泡表面经过PEI-600修饰并携带i RGD肿瘤靶向肽和抗CCR2抗体,试图借助这种微泡提高基因的转染效率并实现超声分子影像引导下乳腺癌基因治疗。方法:首先通过DSPC/DSPE-PEG2000/DSPE-PEG2000-i RGD/Stearic-PEI600(摩尔比为8.5:0.5:0.5:0.5)构建获得单靶向阳离子微泡MBi RGD,再借助于生物素-亲和素桥接系统将抗CCR2的抗体连接于MBi RGD的表面,从而构建获得双靶向的阳离子微泡MBi RGD/CCR2,并测定微泡的颗粒大小、表面电位以及i RGD/CCR2的携载量。p GPU6/GFP/Neo-sh AKT2被选择用来测试该靶向阳离子微泡的DNA装载效率及其基因治疗的效果。人脐静脉内皮细胞HUVECs和乳腺癌细胞MCF-7被用来检测该靶向微泡的体外粘附效率。通过应用超声靶向破坏微泡技术,我们比较了双靶向阳离子微泡MBi RGD/CCR2与单靶向微泡MBi RGD和MBCCR2以及非靶向阳离子微泡MBcontrol之间的基因转染效率。AKT2基因的干扰效率通过免疫印迹法进行验证。处理之后的细胞活性、细胞周期阻滞分别通过CCK-8、流式细胞仪进行分析。此外,通过建立乳腺癌的皮下移植模型,我们还检测了其体内的超声分子影像及基因治疗抗肿瘤效果。结果:结果表明:几种表面修饰后微泡之间的粒径和表面电位没有显著的差异,但它们的基因装载效率比未修饰的阴离子微泡具有显著的提高,表明PEI-600修饰后的可以提高超声联合微泡的基因装载效率,同时也提示靶向肽和抗体的表面修饰不影响其对DNA的装载效率。细胞靶向实验表明双靶向阳离子微泡MBi RGD/CCR2较单靶向微泡MBi RGD和MBCCR2有着更高的细胞靶向效能。此外,我们也发现载基因的双靶向阳离子微泡MBi RGD/CCR2较其他几种微泡有更高的基因转染效率,可导致靶细胞细胞活性更低,细胞周期阻滞效果更强。免疫印迹结果证实处理后的细胞AKT2蛋白的表达量明显降低。在体内实验中,我们发现双靶向阳离子微泡MBi RGD/CCR2较单靶向微泡有着更好的肿瘤超声靶向显影效果。当结合治疗基因并联合超声辐照之后,发现MBi RGD/CCR2较单靶向微泡MBi RGD,MBCCR2和MBcontrol表现出更强的肿瘤生长抑制效果。结论:我们的研究提供了一种新的双靶向阳离子超声微泡,该微泡不仅可以用于肿瘤的超声分子成像,还可以作为质粒的载体用于抗乳腺癌基因治疗,有望成为一种新的超声成像引导基因治疗的超声分子影像探针。