三唑磷、氯霉素、玉米赤霉烯酮化学发光酶免疫分析方法研究

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本文研究建立了三唑磷、氯霉素(Chloramphenicol, CAP)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone, ZEN)的化学发光酶免疫分析方法(Chemiluminescent enzyme immunoassay, CLEIA)。首先对CLEIA方法条件进行了一系列优化:1.以酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)确立三种药物抗原抗体的最适工作浓度。2.以鲁米诺和过氧化氢作为化学发光底物,通过对CLEIA化学发光增敏液中缓冲体系、发光增强剂、鲁米诺浓度及氧化剂浓度的筛选,得到具有良好性能的发光增敏液。3.在此基础上,通过对化学发光板、包被缓冲液、反应缓冲液、封闭物质的选择及有机溶剂与浓度等条件的优化,确立了方法条件。在最适工作浓度和最优方法条件下,三唑磷CLEIA方法的检测限(IC10)为0.14ng/mL,检测灵敏度(IC50)为1.23ng/mL;氯霉素CLEIA方法的IC1o为2.96ng/mL, IC50为19.25ng/mL;玉米赤霉烯酮IC10为0.031ng/mL, IC50为0.19ng/mL。结果表明建立的CLEIA分析方法在灵敏度方面具有一定优势,特别是三唑磷的CLEIA分析方法,相比于ELISA分析方法其检测灵敏度和检测限提高了1-2个数量级。对三种药物的CLEIA方法进行准确度和精密度分析,结果显示建立的CLEIA方法准确性及精密度良好,可靠性较高,能够满足对三种药物残留分析的一般要求。将构建的CLEIA分析方法应用于样品检测。首先研究基质效应以确立各样品提取液的稀释倍数。优化的CLEIA方法分别应用于稻田水样、土样、糙米样品中三唑磷检测;虾肉、鸡肉、猪肉样品中CAP检测;以及玉米、小麦、高粱米样品中ZEN检测。结果显示三唑磷样品检测添加回收率为67-113%,变异系数0.08~24.53%; CAP样品检测添加回收率为72~95%,变异系数0.09~23.08%:ZEN样品检测添加回收率为80~111%,变异系数1.05~16.07%。研究表明三种药物的添加回收率满足一般残留分析的要求,变异系数在允许的范围内波动,其检测方法可用于实际样品的定性、定量分析。本研究显示出CLEIA分析方法在农药、兽药、生物毒素检测方面具有良好的应用前景,并为建立同类其他药物的化学发光酶免疫分析方法提供参考和理论依据。
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