高产乳糖酶酵母菌的筛选、培养基优化及生长模型的研究

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本文对分离自牧民家庭酸马奶酒样品中的18株酵母菌进行高产乳糖分解酶的酵母菌菌株筛选,在同容量牛乳中接入相同比例酵母菌(1%),培养48h,在接种前测量原乳中的乳糖含量及pH值,在接种后12h,24h,48h测量接入酵母菌牛乳中的乳糖含量及pH值,由实验数据比较接入不同菌株的牛乳中乳糖变化量及PH值,从中筛选出1株产乳糖酶量高的菌株(J20-3)。测得接入酵母菌J20-3前牛乳中乳糖含量为59.69mg/mL,接入后12后变为17.64 mg/mL,为接种前29.55%;24h变为1.87 mg/mL,为接种前3.13%,24h后乳糖量基本不再变化。在此基础上,对酵母菌(J20-3)培养基组成成分乳糖、酵母汁、蛋白胨比例依据二次相应曲面法(Box-Behnken)优化,设计了三因素三水平的响应面分析(RSA)试验,共有15个试验点。优化结果为1000mL酵母菌培养基中乳糖为18.31g,酵母汁为5.23g,蛋白胨为10.43g。利用优化过的培养基培养酵母菌J20-3,参照中性乳糖酶的测定方法—吉斯特·布洛卡兹法测定粗酶液中酶活力。定在37℃,pH为7.3的条件下测定其单位菌体干重量所含乳糖酶,作为判别其乳糖酶活力的一个客观指标。测得单位重量酵母菌的乳糖酶含量:23.11IU/g。连续培养酵母菌J20-324h,每隔2h测量其菌体干重,以logistic模型为基础,建立该酵母菌在30℃下,菌体干重关于时间的生长模型。由试验数据确定模型参数:Cm=1.04kg/m3,Co=0.32kg/m3。将试验数据代入LN(Cm/C0-1)+LN[Cx/(Cm-Cx)]并对时间t作图,得到:斜率为k=0.194,截距intercept=0.04.最后建立方程: Cx=0.32*EXP(0.04+0.194*t)/(1-(0.32/1.04)*(1-EXP(0.04+0.194*t)))。实验数据与理论值相对误差在5%左右,模型拟和较好。
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