论文部分内容阅读
目的检测和探索蛋白酶Nexin-1(PN1)在急性髓系白血病(AML)细胞中的表达及其作用,同时验证在AML中PN1对凋亡抑制蛋白XIAP的抑制作用。进而探索和验证PN1是否通过抑制AML细胞中XIAP的表达来促进AML对阿糖胞苷的敏感性,为解决AML治疗中的阿糖胞苷耐药问题提供新的思路和理论依据。方法通过电转染和脂质体转染方法分别将PN1质粒及siRNA整合入AML细胞中,利用实时荧光定量PCR和Western Blot检测AML细胞系中PN-1、XIAP的相对表达,采用PI-AnnexinV标记细胞和流式细胞学方法检测细胞的凋亡。利用CCK8试剂检测细胞增值,确定阿糖胞苷作用于AML细胞的最适浓度及时间;电转染PN1质粒同时加阿糖胞苷处理AML细胞后,检测细胞的凋亡情况以判断AML对阿糖胞苷敏感性,同时检测PN1和XIAP的表达以确定其作用机制。结果PN1在五株AML细胞系中均有表达,且表达水平不同。上调PN1后AML细胞的凋亡增加,且AML细胞内XIAP的RNA水平及蛋白水平均降低,下调PN1后结果相反。经阿糖胞苷处理后,AML细胞中XIAP的表达升高。阿糖胞苷处理联合转染PN1后,细胞内XIAP较阿糖胞苷单独处理组低,且细胞凋亡较高。即上调的PN1可以抑制阿糖胞苷诱导的XIAP的表达。结论PN1可诱导AML细胞系发生凋亡,是AML细胞内XIAP的天然抑制子。PN1可抑制阿糖胞苷诱导的AML细胞内XIAP的表达,从而促进AML细胞对阿糖胞苷的敏感性。