论文部分内容阅读
第二章PIEZO2基因与青少年特发性脊柱侧凸本体感觉异常的相关性研究目的:本研究旨在探讨AIS患者的本体感觉及PIEZO2基因在AIS侧弯发生发展中的潜在作用。方法:采用本体感觉试验比较健康对照组与AIS患者本体感觉功能的差异。根据跌倒风险评分(Cut-off值为36),将AIS患者分为本体感觉受损组(IP)和本体感觉未受损组(UP)。术中采集34例AIS患者的椎旁肌。采用t检验比较受损组和未受损组的PIEZO2基因组织表达水平。比较AIS患者与对照组的肌梭内平均肌纤维数量。结果:本体感觉试验结果显示,患者跌倒风险指数和FK试验值明显高于对照组(跌倒指数:41.7±16.5 vs.1 1.3±8.3,P=0.004;FK 试验位移距离:64.1±16.3cm vs.42.2±7.9cm,P=0.003;FK 试验旋转角度:25.2°±20.1°vs.15.8°±14.2°,P=0.002)。此外,与未受损组相比,受损组的PIEZO2基因组织表达水平显著降低(0.51±0.24vs.1.00±0.33,P=0.004)。IP组AIS患者肌梭内平均肌纤维数量明显低于UP组(2.2±1.3 vs.3.5±2.1,P=0.04)。PIEZO2基因表达水平与肌梭内平均肌纤维数量呈正相关(r=0.352,P=0.04)。结论:PIEZO2基因的异常表达可能通过影响本体感觉和肌梭内肌纤维数量而在AIS中起作用。未来需要进一步的研究来阐明PIEZO2基因在AIS病因学中的作用。第三章Wnt/B-caten i n信号通路在AIS侧弯两侧不对称表达的机制研究目的:本研究旨在探讨AIS侧弯两侧椎旁肌是否存在Wnt/B-catenin信号通路的不对称表达,并分析其在侧弯发生中的作用。方法:选择3组患者作为研究对象。第一组由40名年龄在10-18岁的女性AIS患者组成。第2组由20名年龄、侧弯形态和Cobb角大小与AIS匹配的CS患者组成。第三组由24例无脊柱畸形的青少年女性腰椎间盘突出症(LDH)患者组成。术中收集所有研究对象的椎旁肌肉。对于CS患者,从侧弯顶椎区域的凹侧和凸侧采集深层椎旁肌。对于AIS患者,除了顶椎区域外,还从上端椎区两侧采集样本。对于LDH患者,从L5双侧水平采集样本。通过QPCR和Western blot检测WNT/B-catenin信号通路上的3个基因在组织中的表达水平,包括LBX1、B-catenin和 PAX3。结果:AIS组平均年龄为14.4±1.7岁,CS组平均年龄为14.2±1.5岁,LDH组平均年龄为14.8±2.8岁。AIS组平均Cobb角为49.1±10.7°,CS组为49.8±11.2°。三组之间平均年龄无显著差异,AIS患者组与CS患者组之间Cobb角无显著差异。AIS患者凹侧B-catenin、LBX1和PAX3的mRNA和蛋白表达显著低于顶椎凸侧。然而,在上端椎区,这3个基因的双侧组织表达水平无显著差异。此外,3个基因的表达水平在CS患者的顶椎区双侧以及LDH患者的双侧均无显著差异。结论:AIS侧弯顶椎区存在显著的Wnt/B-catenin信号通路不对称表达。易感基因的不对称表达可能在AIS的病因中发挥重要作用。第四章(第一节)IRX基因多态性与中国汉族人群AIS易感性的相关性研究目的:本研究旨在验证中国汉族人群中IRX基因家族与AIS的关系,并进一步确定既往报道的AIS易感区域中的靶基因。方法:对1323例患者和1670例年龄匹配的健康对照进行SNP位点rs12517904和rs1 17273909基因分型。在手术中采集70例AIS患者和20例先天性脊柱侧凸患者侧弯顶椎区两侧的深层椎旁肌。采用学生t检验比较两组之间的IRX基因组织表达水平。采用单因素方差分析法比较不同基因型间IRX基因的表达。应用Pearson相关性分析探讨IRX1基因表达与侧弯严重程度的关系。结果:rs12517904患者的TT基因型频率明显高于对照组(37.6%vs.34.7%,P=0.04)。等位基因T可显著增加罹患AIS的风险。AIS患者的IRX1组织表达水平明显低于对照组。TT基因型患者的IRX1表达明显低于GG基因型患者。结论:我们的大规模病例对照研究证实,IRX1基因rs12517904与中国人群AIS的发生有显著相关性。此外,IRX1的表达下降与AIS的侧弯严重程度显著相关。IRX1在AIS发病和进展中的作用值得进一步研究。第四章(第二节)HSPG2基因罕见变异与青少年特发性脊柱侧凸易感性的相关性研究目的:本研究旨在探讨HSPG2基因罕见变异与中国青少年特发性脊柱侧凸易感性的关系。方法:采用多重连接酶检测反应对1752例患者和1584例正常对照组的HSPG2基因的SNV p.asn786ser进行基因分型。对90例患者和26例对照组的椎旁肌中HSPG2的mRNA表达进行定量分析。采用学生t检验分析HSPG2表达的组间比较。采用Pearson相关分析法分析患者HSPG2表达与侧弯严重程度的关系。结果:本研究未发现既往报道的HSPG2的SNV p.asn786ser突变病例。患者HSPG2基因的mRNA表达水平与对照组无显著差异(0.0016±0.0013 vs.0.0019±0.0012,P=0.29)。42例侧凸角度大于60度的患者被分为重度侧弯组。另外58名患者被分为中度侧弯组。这两组的HSPG2表达水平亦无显著差异(0.0015±0.0011 vs.0.0017±0.0014,p=0.57)。HSPG2组织表达水平与侧弯严重程度无显著相关性(r=0.131,P=0.71)。结论:HSPG2基因与中国人群AIS的易感性和侧弯表型无关。可以在更大样本的AIS患者中对HSPG2基因进行测序,以确定潜在的致病突变。第四章(第三节)AKAP2基因多态性与青少年特发性脊柱侧凸易感性的相关性研究目的:本研究旨在探讨AKAP2基因突变与中国汉族人群AIS易感性的相关性。方法:本研究—共收集了 1254例AIS患者和1232例健康对照,采用等位基因特异性多重连接酶检测反应对AKAP2基因的SNV c.2645a>c进行基因分型。采用Haploview(v2.6)方法选择了 AKAP2基因5’非翻译区(UTR)和3’ UTR内的单核苷酸多态性位点。GWAS数据库由961名AIS患者和1499名对照组成的基因分型信息组成。使用QPCR技术检测33例患者和18例年龄匹配对照组外周血中AKAP2的相对mRNA表达水平。采用学生t检验对病例和对照组进行比较。通过Cochran-Armitage趋势检验,使用plink(v1.90)计算每个SNP位点与疾病的相关性。结果:所有患者和对照组在AKAP2基因c.2645a>c中均表现为AA基因型,无一例发生突变。一共分析了 116个覆盖AKAP2的单核苷酸多态性位点,这些单核苷酸多态性的等位基因频率在病例和对照组之间无显著差异。患者外周血中AKAP2的mRNA表达水平与对照组无明显差异(1.9±0.8vs.1.8±0.7,P=0.66)。结论:我们的大样本队列研究显示AKAP2基因罕见变异与中国人群AIS易感性无显著关联。在未来的研究中,有必要对先前报道的罕见变异的功能进行研究,探讨该突变是否能调节AKAP2的表达。可以在较大样本的AIS队列研究中对AKAP2进行测序,以检测潜在的突变。