基于四环素调控系统的TRE-C-imp13转基因小鼠的构建及表达分析

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由于真核细胞的基因复制、转录与蛋白质的表达翻译在细胞内分区进行,蛋白质及核酸等生物大分子跨核膜转运成为细胞中最重要的生物学功能之一。importin-β家族蛋白介导的底物核质转运是其中主要的机制。importin13(imp13)是这个家族成员之一,也是目前所知的哺乳动物细胞中唯一能双向转运底物蛋白的蛋白质。目前研究已发现importin13的底物有UBC9,Rbm8,Pax6,NF-YB/NF-YC,GR,myopodin,negative cofactor2,CHRAC-15/17,p12/CHRAC-17和eIF-1A。这些底物大都与发育有关,因此,importin13可能在机体发育中有重要的生物学功能。 2004年,Tao等发现importin13T缺失了N端之后滞留在细胞质;2006年和2008年Tao等发现C-impl3负调控importin13的转运功能;2006年,Yasuka等在小鼠睾丸中发现了importin13的另外一个转录本(TS-imp13),它包含Timportin13的第六个内含子的75 bp及之后的C端的14个外显子。他们推测TS-imp13可能对importin13转运功能起到负调控作用。最近,Giagtzoglou等发现,importin13可调节果蝇神经肌肉连接中神经递质的释放,缺失importin13导致果蝇的视觉能力下降并在幼虫阶段死亡,说明importin13对神经的功能和机体的发育有重要的功能。 为了研究importin13在发育过程,特别是神经发育过程中的作用,本研究构建了N端缺失的C-impl3(a.a.450-963)转基因小鼠TRE-C-imp13,并根据Tet-on系统原理,实时调控其表达。在100只出生动物中,Genotyping检测到27只含有TRE-C-imp13转基因后代(27 founders);RT-PCR和real-time PCR方法筛选出四个表达有C-imp13的founder,为今后研究importin13在发育过程中的作用提供了一个重要的动物模型。
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