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布鲁氏菌病是一种危害严重的人兽共患病,存在于170多个国家和地区,仅个别发达国家宣布净化了布鲁氏菌病。本研究以51株2010-2016年间我国北方部分省份分离的羊种布鲁氏菌为研究对象,进行了:1.传统生化方法分型。结果显示,主要是羊种3型,占整个羊种分离株的92%,其次是羊种1型和2型。2.MLVA-15分型方法的建立。利用在线分析软件(http://tandem.bu.edu/trf/trf.html)对参考菌株16M基因组的VNTR位点进行检索,从基因组中95个VNTR位点选取串联重复序列匹配度100%的47个VNTR位点,其中25个位于1号染色体,22个位于2号染色体。经HGDI指数分析,选取15个VNTR位点建立MLVA-15,其中8个VNTR位点与传统的MLVA-16相同,增加7个高度多态性VNTR位点。应用软件BioNumerics7.6聚类分类表明,MLVA-15对国内菌株的区分明显高于传统的MLVA-16。MLVA-15方法减少了MLVA-16中不具有多态性的位点,提高了对布鲁氏菌流行菌株的鉴别能力,可以满足布病流行病学调查中对传染源和传播途径精确追溯的需求。3.多位点可变串联重复序列分析(MLVA)。经MLVA-8分析,42型占整个分离菌株的70.6%,其次是63、43型;发现两个新的基因型。MLVA-16分析发现28个基因型,反映了我国羊种布鲁氏菌较高的遗传多态性;最小进化树分析证明,我国羊种布鲁氏菌基因型与地中海国家的菌株关系最为密切,揭示了在长期的历史过程中羊种布鲁氏菌由地中海地区向我国传播的主要途径。4.多位点序列分析(MLSA)。MLSA-21结果显示,37株羊种布鲁氏菌流行株序列型为ST8,发现3个新序列型,ST137序列型1株、ST138序列型1株和ST139序列型12株。该方法具高重现性和规范化的优点。5.基于全基因组单核苷酸(WGS-SNP)分析。中国目前流行的羊种布鲁氏菌均属东地中海谱系。应用Mega7软件做进化分析表明,中国的流行菌株与土耳其,科威特等地中海国家及亚洲国家关系紧密且都与羊种2型参考菌株聚为一簇。