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自1953年Gibbon首次应用体外循环在心脏停跳条件下施行心内直视手术以来，心脏外科已取得了飞速发展。但由于术中正常冠脉血运被阻断，心肌可因缺血缺氧而损伤、坏死。已证明心脏手术后许多并发症、死亡率与心肌损伤密切相关。 1955年Melrose应用心脏停搏液进行心肌保护，发展至今，心肌保护领域理论已在临床整体水平、亚细胞水平及分子水平获得全方位的突破，其中心肌保护液成分和心肌保护液输注方法的改进是临床心肌保护研究的重要内容。研究发现，阻断循环时心肌即使得到了保护，但恢复灌注时，再灌注却会反常地进一步造成损伤的加重。表现为心肌水肿，氧和基质利用能力下降，高能磷酸盐和糖原减少或耗尽，细胞内大量钙盐沉积，线粒体严重受损，以及心肌细胞收缩功能减弱和心室顺应性改变。因为此现象出现在恢复血液循环后数分钟，故称为缺血再灌注损伤（IschemiaReperfusion Injury，IRI）。现已证明，中性粒细胞和氧自由基是造成IRI的重要因素。冠状血管内皮损伤是IRI发生、发展中的一个重要环节，同时，其本身是缺血再灌注后氧自由基的初始来源之一。因此，保护冠状血管内皮与保护心肌具有同样重要的意义。 1987年，首次证明了内皮衍生性血管舒张因子的主要活性成分是一氧化氮（NO）。在血管系统，NO被认为具有扩张血管、抑制血小板与中性粒细胞粘附、聚集、激活的功能。目前，关于NO与心肌缺血再灌注损伤关系的研究颇多，但研究结果分歧较大。其原因可能fi不同NOS亚4jJ表达，活性程度及与之有关的NO含量在心肌缺血再灌注过程中发生紊乱有关。冈此，本实验旨在阐明心肌缺血再灌注过程中不同时点的NOS活性、基因表达水平及NO产量。为在临床体外循环工作中选择合适的时机添加 NO前体（LAfginine）或供体提供依据，以取得更佳的心肌保护效果。 主要研究工作：（l）建立在体心肌缺血再灌注动物模型；（二）测定在心肌缺血再灌注过程中不同时点的 NOS活性及 NO产量的动态变化；（）采用 RT－PCR技术定量分析内皮细胞性 NOS（eNOS）／诱生性 NOS（iNOS）基因表达水平的动态变化。 材料和方法 本实验通过结扎新西二兔冠状动脉左前降支，继而开放，制造在体心肌缺血再灌注模型。实验分为六组：组1为止常假手术组心肌（n＝5）；组2为缺血30min心肌（n＝5）；组 3为缺血 60．l。in心肌（n＝5）；组 4为缺血 60min再灌注 30min心肌 （n—5）；组 5为缺血 60min再灌注 60Inin心肌（n＝5）；组 6为缺血 60min再灌注120min心肌（n—5）。 左侧颈总动脉置管，连按P。Lab生物信号采集处理系统，记录动脉血压及心率。实验结孜后，以0．l％Evan上山e染色区别Jll常心肌与缺血。0肌，缺血。0肌不染色。取不染色心肌置液氮保存。以缺血．心肌制备 10％心肌组织匀浆，按照试剂盒说明书测定＊OS活性及＊O含量。采用RT干CR方法检测心肌组织咖OS、MOS基因的表达。以TRIZOI方法提取组织总RNA，以OhgodT15为引物逆转录CDNA，取GAPDH作为内参照，PCR扩增eNOS、iNOS基囚的特异性片段，凝胶电泳分离后，用紫外图像分析软件作定量处理，计算eNOS、iNOS基冈的相对表达量。 各组数据以 mean士SE表示，以 ONE－WAY ANOVA方法进行统计学分析。Prt0．05认为有显著性差异，P ＜ 0刀1认为有非常显著性差异。统计学处理全部应用 2SPSS（VS．0）软件包完成。 实验结果 l缺血期及再灌注期平均动脉压明显低于缺血前（P＜0刀1），说明缺血是可靠的。 2．正常心肌组NOS活性为9．62士1．65U砌g蛋白质；缺血30min心肌组NOS活性为 6．20上1．ZIU砌g蛋白质：缺血 60min心肌组 NOS活性为 5．95土1．80 U／mg蛋白质：缺［fll60min再沸注30min心肌组NOSj舌性为7．24士2．24U／mg蛋白质：缺血60min丙灌注mmh心肌组mS活性为8．抡土1．87w吧i白质；缺血60m扣再灌注120m1n心肌组 NOS活性为 9．68士2．26 U／mg蛋白质。正常心肌组 NOS活性高于缺血 30min、60min组心肌，差异有非常显著性意义（P＝0．008及0．005）。缺血60min再灌注120min心肌组NOS活性高于缺血30min、60min组心肌，有非常显著性差异（P＝0刀07及0刀04）。缺血60min再灌注60min心肌组NOS活性高于缺血60min组心肌，有显著性差异（P。口刀47）。 3，止常心肌组NO含量为 104．39士7．98pllo＊；缺血 30min心肌组 NO含量为 62．50士8．68pmol／l；缺血．60min，O肌组NO含量为 61．01土12．65pmol／I；缺血．60min再灌注 30min心肌组 NO含量为 67．83士16．59卜mol／l；缺血．60min再灌注 60min心肌组NO含量为 65刀5上22卫0川no川；缺血．60min再灌注 120min心肌组 NO含量为 90厂9士 8．34pmol／l。正常心肌组 NO含量与缺血 30min直至缺血 60min后再灌注 60min心肌组相比，均有非常显著性差异p。0．000人缺血 60min再灌注 120min心肌组与缺、