研究目的: 真核细胞中X盒结合蛋白1（X-box binding protein1，XBP1）作为一种转录活化因子发挥着多种不同的功能，具有广泛的生物学效应，参与机体的多种生理及病理过程，其对疾病发生及发展的影响是近年来研究的热点。本研究首先运用多聚酶链式反应（PCR）、基因克隆等分子生物学技术构建了重组质粒pET32a-XBP/u，通过将其转化入大肠杆菌E.coli BL21，得到大量包涵体表达的目的蛋白XBP1u，利用Nj2+-NTA树脂对目的蛋白进行纯化，之后进一步应用Western blot对纯化的目的蛋白进行分析，以鉴定得到的纯化XBP1u蛋白，用该纯化蛋白免疫家兔制备抗XBP1u多克隆抗体，从而为进一步研究XBP1u的生物学功能及其他相关后续研究奠定基础。 研究方法: （1）使用总RNA提取试剂盒（TRIZOL试剂盒）从肝癌细胞（HepG2）中提取总RNA，并利用RT-PCR两步法扩增出目的片段XBP1u。 （2）利用分子克隆技术将目的基因克隆到pGEM-T载体上，构建成重组载体pGEM-T-XBP1u。 （3）利用分子克隆技术构建原核表达载体pET32a-XBP1u。 （4）将重组载体pET32a-XBP1u转化入大肠杆菌E.coli BL21，用IPTG诱导转化菌大量表达，得到目的蛋白XBP1u，SDS-PAGE分析其表达形式，并利用Ni2+-NTA树脂对目的蛋白进行纯化，之后用BCA法测定所表达的目的蛋白浓度。 （5）利用Western blot鉴定目的蛋白的正确性。 （6）用纯化后的目的蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体。 （7）ELISA检测兔抗XBP1u血清的效价。 （8）Western blot检测兔抗XBP1u血清的特异性。 研究结果: （1）扩增出了目的基因片段XBP1u，经测序XBP1u由785bp组成，为编码261个氨基酸残基的多肽。 （2）成功构建了原核表达载体pET32a-XBP1u，并转化入大肠杆菌E.coli BL21。 （3）经IPTG诱导大量表达后，SDS-PAGE电泳显示目的蛋白相对分子量为33KD，主要以包涵体形式表达，经NI2+-NTA柱纯化后，纯度达90％以上，BCA法测得蛋白质含量为1.42mg/ml。 （4）Western blot对目的蛋白进行分析，由于重组载体pET32a-XBP1u中的pET32a带有His标签，因此可以采用anti-His抗体和anti-XBP1u抗体同时检测XBP1u的抗原性。 （5）ELISA检测兔抗XBP1u血清效价为1：64000。 （6）免疫印迹检测兔抗XBP1u血清的特异性。 结论: 成功构建pET32a-XBP1u原核表达质粒，转化到大肠杆菌E.coliBL21表达菌获得了目的蛋白XBP1u，表达量较高，纯度较高；并进一步制备了纯度较高的抗XBP1u多克隆抗体，为研究XBP1u的生物学功能及其他相关后续研究奠定基础。