【摘 要】
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目的:既往研究发现糖尿病心肌病患者外周血中miR-122-5p水平升高,且其表达水平与心功能损伤呈负相关,这表明miR-122-5p可能参与了糖尿病心肌病的进展,但其在糖尿病心肌病中的具体作用机制尚不完全清楚。本研究是为了阐明miR-122-5p在高脂饮食诱导的糖尿病心肌病中的作用及机制。方法:本研究使用携带肝脏特异性启动子（Thyroxine Binding Globulin,TBG）的重组腺相
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目的:既往研究发现糖尿病心肌病患者外周血中miR-122-5p水平升高,且其表达水平与心功能损伤呈负相关,这表明miR-122-5p可能参与了糖尿病心肌病的进展,但其在糖尿病心肌病中的具体作用机制尚不完全清楚。本研究是为了阐明miR-122-5p在高脂饮食诱导的糖尿病心肌病中的作用及机制。方法:本研究使用携带肝脏特异性启动子（Thyroxine Binding Globulin,TBG）的重组腺相关病毒载体（Recombinant Adeno-associated Virus 8,r AAV8）在肝脏中特异性过表达miR-122-5p或抑制miR-122-5p表达,用携带心肌细胞特异性启动子（Ttroponin T,Tn T）的重组腺相关病毒载体（Recombinant Adeno-associated Virus 9,r AAV9）在心肌细胞中特异性过表达miR-122-5p的靶点醛缩酶（Aldolase,ALDOA）。通过心脏超声和导管以确定心脏结构和功能改变。腹腔注射葡萄糖耐量实验（Intraperitoneal Glucose Tolerance Test,IPGTT）用来确定高脂诱导的糖尿病心肌病模型。此外,还测量了体重（Body Weight,BW）、心脏重量（Heart Weight,HW）、胫骨长度（Tibial Length,TL）等基本参数。使用苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色和麦胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin,WGA）染色检测心肌细胞横截面积。通过q PCR检测小鼠心脏、肝脏、肾脏和血浆中miR-122-5p表达水平,以及心脏和肝脏中pri-miR-122表达水平。使用Ago2-RIP-q PCR筛选miR-122-5p在心肌细胞的靶点,使用Western blot和双荧光素酶报告基因实验验证miR-122-5p的靶点。结果:心脏超声和导管结果显示高脂喂养24周小鼠心脏收缩和舒张功能均受损。腹腔注射葡萄糖耐量实验提示高脂喂养24周小鼠糖耐量明显受损。与对照组相比,高脂喂养24周小鼠体重和心脏重量与胫骨长度比值增加。苏木素-伊红染色和麦胚凝集素染色结果显示高脂喂养24周小鼠心肌细胞横截面积增加。与对照组相比,高脂喂养24周小鼠心脏、肝脏和血浆中miR-122-5p水平升高,pri-miR-122只在肝脏中升高。与对照组相比,肝脏特异性过表达miR-122-5p可加重高脂喂养小鼠心脏收缩和舒张功能障碍,使高脂诱导的心肌细胞横截面积进一步增大,而肝脏特异性抑制miR-122-5p表达则相反。Western blot,Ago2-RIP-q PCR和双荧光素酶报告基因实验表明ALDOA为miR-122-5p的靶点。心肌细胞特异性过表达ALDOA可以部分逆转肝脏特异性过表达miR-122-5p引起的小鼠心脏收缩与舒张功能障碍和心肌细胞横截面积的增加。结论:本研究发现高脂诱导的糖尿病心肌病小鼠肝脏中miR-122-5p水平升高,并可释放到外周血中,经由血液循环进入心脏,通过抑制心肌细胞中ALDOA的表达加重高脂喂养小鼠心肌细胞肥厚和心脏收缩与舒张功能障碍。
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