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DC是专职的抗原提呈细胞,是连接天然免疫与获得性免疫的桥梁,是平衡免疫应答与免疫耐受的关键。作为免疫系统的前沿哨兵,受到病原体或炎症信号的刺激后,DCs进行复杂的成熟过程,从而影响免疫应答的质与量。本研究旨在观察重型乙型肝炎(ACLF)患者外周血树突状细胞两个亚群(mDC和pDC)的频率,单核细胞衍生的树突状细胞(MoDC)表型及刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力的变化。筛选重型乙型肝炎(ACLF)患者60例,慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者40例,并以20例健康者作对照,取入选研究对象的抗凝全血,应用流式细胞术检测外周血循环中mDC和pDC分别占外周血单个核细胞(PBMC)的比例。抗凝全血通过淋巴细胞分离液进行密度梯度法离心,分出PBMC,并进一步经免疫磁珠阳性选择的方法分离单核细胞,细胞因子白介素4和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子体外诱导为MoDC,经poly(I:C)刺激后,用流式细胞仪检测MoDC的表型(HLA-DR、CD83、CD80、CD86),并通过同种混合淋巴细胞反应(MLR)检测MoDC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。1、健康对照组mDC和pDC占PBMC百分率分别为0.52%±0.04%和0.31%±0.02%；CHB组mDC和pDC占PBMC的百分率分别为0.53%±0.11%和0.2%±0.03%；ACLF组mDC和pDC占PBMC的百分率分别为0.18%±0.02%和0.15%±0.02%。ACLF组mDC占PBMC的百分率较CHB组及健康对照组均明显降低(P<0.001),但CHB组与健康对照组差异无统计学意义(P=0.927)。与健康对照组相比,ACLF组和CHB组pDC的百分率均显著降低(P<0.001),但ACLF组和CHB组之间差异无统计学意义(P=0.113)。2、经poly(I:C)刺激后健康对照组MoDC表面MHCⅡ类分子HLA-DR、成熟的标志CD83及协同刺激分子CD86和CD80平均荧光强度的表达分别为302.1±5.6、205.1±13.7、346.7±14.6、38.8±1.0；CHB组HLA-DR、CD83、CD86和CD80表达分别为272.2±3.38、173.0±6.4、315.5±7.93、30.6±0.57；ACLF组HLA-DR、CD83、CD86和CD80表达分别为223.0±5.5、148.2±6.1、219.1±7.1、25.0±0.6。CHB组MoDC四种表面标志物的表达均低于健康对照组,但高于ACLF组。3、MLR检测HBV感染者MoDC刺激T细胞增殖的能力低于健康对照组,重型乙型肝炎组降低尤为显著(P<0.001)。重型乙型肝炎患者外周血mDC和pDC占PBMC比率显著下降,MoDC表型缺失、成熟障碍以及功能低下,可能为重型乙型肝炎的发病机制之一。Toll样受体(TLR)是天然免疫系统中非常重要的一类模式识别受体,TLR3大量分布于树突状细胞,能识别病毒及其复制中间产物,TLR3触发后能促进核因子-κB (NF-κB)和干扰素调节因子3(IRF3)入核,继而分泌大量的促炎性细胞因子及干扰素β(IFN-β),可能与HBV感染的临床结局及预后相关。本研究观察慢性重型乙型肝炎患者外周血树突状细胞TLR3触发后信号转导通路的变化,探讨TLR3信号转导通路的改变与重型乙型肝炎疾病进展的相关性。筛选ACLF患者60例,CHB患者40例,并以20例健康者作对照,抽取入选研究对象的抗凝全血,通过淋巴细胞分离液进行密度梯度法离心和CD14+免疫磁珠阳性选择法分离单核细胞,细胞因子白介素4和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子体外诱导为MoDC,经poly(I:C)刺激后,用流式细胞仪检测TLR3平均荧光强度(MFI),免疫印迹法检测TLR3蛋白水平,实时荧光定量PCR检测TLR3及TLR3信号通路上关键转录因子(核因子κB和干扰素调节因子3)的表达,用液相蛋白流式检测细胞培养上清中促炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清中干扰素β(IFN-β)。1、相对于健康对照组,ACLF组MoDC上TLR3mRNA的表达下降57.7%,而CHB组下降41.5%,ACLF组较CHB组明显降低,三组之间具有显著性差异(P<0.001)。经免疫印迹法检测TLR3蛋白水平的表达趋势与转录水平一致,MoDC上TLR3的表达自健康对照组至CHB组至ACLF组依次减弱。MoDCs上TLR3的MFI在健康对照组明显高于两个疾病组(P<0.001)；而ACLF组TLR3 MFI低于CHB患者(P=0.006),差异具有统计学意义。2、健康对照组MoDC分泌IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、TNF-α、IL-1β的水平分别为：(711.64±61.64)ng/L、(5893.53±377.53)ng/L、(51.66±9.72)ng/L(39±0.89)ng/L、(7370.01±597.66)ng/L、(40.55±4.72)ng/L；CHB组MoDC分泌IL-6、TNF-α、IL-12p70、IL-10、IL-1β和IL-8的水平分别为：(1081.64±82.5)ng/L、(4181.66±413.35)ng/L、(59.44±10.37)ng/L、(36.44±2.66)ng/L、(12627.67±924.33)ng/L、(27.75±2.49)ng/L；ACLF组MoDC分泌IL-6、TNF-α、IL-12p70、IL-10、IL-1β和IL-8的水平分别为：(1551±161)ng/L、(2959.86±415.58)ng/L、(30.62±2.97)ng/L、(29±1.03)ng/L、(19263.61±1110.58)ng/L、(25.12±1.05)ng/L；ACLF组MoDCs分泌IL-6和TNF-α显著高于CHB和健康对照组,IL-12p70、IL-10、IL-1β和IL-8分泌异常。3、MoDCs分泌IFN-β水平在各组之间的差异与TLR3表达趋势相同,健康对照组为(156.10±6.98) pg/ml,CHB组为(133.95±5.45)pg/ml, ACLF组为(74.77±3.1) pg/ml。CHB组MoDCs分泌IFN-β水平低于健康对照组(P=0.019)；ACLF组MoDCs分泌IFN-β水平低于CHB组(P<0.001),更低于健康对照组(P<0.001)。4、针对ACLF患者进一步分析,ACLF中存活组TLR3/IFN-β显著高于死亡组(P<0.001),而TLR3/IFN-β与HBeAg状态无显著相关性。ACLF组患者NF-κB mRNA显著高于CHB和健康对照组,而IRF3 mRNA低于CHB和NC组。与重型肝炎相关的临床参数相关性分析发现TLR3/IFN-β的分泌水平与凝血酶原活动度呈负相关,与总胆红素成正相关,而与谷丙转氨酶和病毒载量无显著相关性。重型乙型肝炎患者TLR3信号转导通路受损,促炎性细胞因子分泌异常,Ⅰ型干扰素分泌降低可能是导致肝细胞严重免疫损伤及HBV持续感染的原因之