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烟草脉带花叶病毒病是由马铃薯Y病毒属(Potyvirus)的烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV)引起的,在我国很多主产烟区均有发生,并且涉及范围和危害程度呈上升趋势。对该病害进行准确及时的诊断是有效控制其发生的重要前提。除TVBMV外,自然侵染烟草的马铃薯Y病毒属的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和烟草脉斑驳病毒(Tobacco vein mottling virus,TVMV)等也能引起脉带症状,加上烟草病毒病复合侵染现象严重,根据症状很难将TVBMV与它们区分。利用血清学和分子生物学等检测手段虽然能准确诊断,但操作复杂,需要专门的实验仪器。为建立一种快速、特异、简便的检测烟草脉带花叶病毒的方法,本文研制了TVBMV快速检测试纸条,研究结果如下:利用RT-PCR方法获得了烟草脉带花叶病毒(TVBMV)陕西分离物的外壳蛋白(CP)基因。序列分析表明,TVBMV陕西分离物的CP基因全长为816 bp,与GeneBank中已报道的9个国内外分离物相比,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为90.28 %~98.15 %和97.05 %~100 %,与山东蒙阴分离物关系最近。将TVBMV CP基因克隆到pMD18-T Simple Vector,经BamH I/Not I双酶切得到目的片段,定向插入到pET30a载体中,构建了原核表达载体pET30-TVBMV CP,并转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行诱导表达。以表达产物为抗原免疫家兔制备了特异性抗血清。在大肠杆菌中TVBMV CP获得了高效表达,分子量约为37 kD,ELISA法测定抗血清效价为1/6400。Western -blot检测结果表明,制备的抗血清可用于检测发病植株。应用胶体金标记技术和免疫层析原理,在玻璃纤维膜、硝酸纤维膜的检测带和质控带上分别喷上胶体金与烟草脉带花叶病毒兔多克隆抗体的偶联物、烟草脉带花叶病毒兔多克隆抗体和羊抗兔IgG,研制出烟草脉带花叶病毒快速检测试纸条。病汁液稀释100倍后仍可快速检出,3~10 min即可显示结果。对烟草上危害严重的四种病毒进行测试,均无非特异性反应。4℃干燥密封保存的试纸条有效期大于1个月。用试纸条对田间病株进行随机检测,结果与RT-PCR检测结果一致。