桃叶珊瑚苷检测方法开发及其在糖尿病大鼠体内药物代谢动力学研究

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:handy1989
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糖尿病(DM)是一种常见的危害人类健康的内分泌代谢性疾病,其特征是由于胰岛素分泌系统功能障碍或缺陷而引起的高血糖。除了典型的“三多一少”症状,长期的高血糖可能会引起包括大血管病变和微血管病变等一系列并发症,严重危害人体健康,因此,糖尿病的有效治疗势在必行。与西药相比,中药治疗DM具有疗效稳定、温和且低毒的特点。近年来,越来越多具有降糖活性的中药成分被报道,桃叶珊瑚苷(AU)就是其中一种,已有研究报道AU能够降低血糖。目前关于AU的药物代谢动力学、生物活性和组织分布研究日趋完善,而有关AU在糖尿病状态下药物代谢动力学的研究却鲜有报道。因此本研究拟用1型糖尿病大鼠模型,探究AU在糖尿病状态下的药物代谢动力学行为以及AU在正常大鼠与1型糖尿病大鼠体内的药物代谢动力学差别。在AU的药物代谢动力学研究中,对样本中AU的有效萃取和分析也是尤为重要的。本研究采用超分子溶剂(SUPRAS)分散液液微萃取的前处理技术结合超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测血清中的AU浓度。样品经过蛋白沉淀净化后,用1.0 mL正戊醇,4.0 mL四氢呋喃和35.0 mL超纯水形成的SUPRAS进行分散液液微萃取,萃取时间为2.5 min。以乙腈-10 mmol/L甲酸铵水溶液(pH=3.5)为流动相,进行梯度洗脱,在电喷雾(ESI)正离子模式下采用多反应监测模式(MRM)进行分析检测。结果显示,最优实验条件下,AU在3 ng/mL-10μg/mL的范围内呈现良好的线性关系(r>0.999),检出限(LOD)为1 ng/mL,定量限(LOQ)为3 ng/mL。在低(10 ng/mL)、中(1000 ng/mL)和高(10000 ng/mL)3个添加水平下的回收率为103.60%-119.33%,相对标准偏差(RSD)为0.33%-14.27%。表明该前处理方法和仪器分析方法定量限低,回收率高,重复性好,可用于血清中AU的检测。利用优化的前处理方法和建立的分析方法对正常大鼠和1型糖尿病大鼠腹腔注射给药AU 5 mg/kg后不同时间点的血清样品中AU的浓度进行了检测分析,检测分析的数据利用DAS 3.0进行非房室模型数据分析。结果显示,AU在1型糖尿病大鼠体内,除tmax以外的其它药物代谢动力学参数均与正常大鼠体内各参数存在差异,1型糖尿病大鼠体内AU的Cmax、AUC(0–t)和AUC(0-∞)有所增加,t1/2、MRT(0-∞)、Vz/F和CLz/F有所降低。表明1型糖尿病状态会影响AU的药物代谢动力学行为,旨为AU的药物代谢动力学特征和治疗1型糖尿病的合理用药进行补充并提供可靠的科学依据。
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