宫颈癌发病以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的感染为最重要的因素。其详细致癌机制仍在探讨之中,人们对其了解正在不断加深。HPV诱发宫颈癌的主要机制是其产生的E6和E7两个癌蛋白分别与抑癌蛋白p53和Rb结合,经过泛素-蛋白酶体途径诱导两个抑癌蛋白降解,使其失去对细胞生长周期的正常调控,导致遗传基因损伤的积累,最终发展为肿瘤。据研究表明,在高危型HPV引起的宫颈癌中,p53和Rb蛋白表达水平降低是由于两者会经过泛素-蛋白酶体途径降解而导致的。1.蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合顺铂对宫颈癌细胞增殖的影响临床上硼替佐米(bortezomib,BTZ)单药同其他常规化疗药物联用治疗多骨髓瘤患者取得了良好的疗效。顺铂(cisplatin,CIS)为临床上常用的细胞周期非特异性强效抗癌药,我们的研究主要是围绕两者联合处理会对宫颈癌HeLa细胞增殖产生的效果,处理后HeLa细胞内抑癌蛋白p53和Rb水平的变化,以及这些变化能否用来为宫颈癌的治疗提供一定理论依据而展开的。目的:观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响并研究其机制。方法:我们将实验分为空白对照组、单纯顺铂组、单纯硼替佐米组、联合用药组,并通过CCK-8法检测各组细胞的增殖抑制率,Western-blotting检测各组细胞p53与Rb蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡比率。结果与讨论:结果显示,单纯顺铂组及单纯硼替佐米药组细胞生长状态差于空白对照组;联合用药组细胞生长状态最差,联合用药组细胞增殖抑制率明显高于其他各组(P<0.05)。与空白对照组相比,p53表达量在单纯顺铂组及联合用药组中明显升高(P<0.05),在单纯硼替佐米药组的表达无明显变化;与空白对照组相比,Rb表达量在单纯硼替佐米组中明显升高(P<0.05),在其他组的表达无明显变化。流式结果显示顺铂和硼替佐米在诱导细胞凋亡方面具有协同作用。我们得出结论,顺铂可能通过调控p53通路对宫颈癌HeLa细胞增殖产生抑制作用;硼替佐米可能通过调控Rb通路对宫颈癌HeLa细胞增殖产生抑制作用;蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合顺铂可以增强对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用。2.蛋白酶体抑制剂类化合物的活性筛选PI-1840是一种1,2,4-恶二唑类化合物,其对蛋白酶体β5亚基有很高的抑制率,IC50值很低,我们的合作伙伴以其为先导,将其核心结构恶二唑环,分别用三唑环、咪唑环和呋喃环合成了 003、007、013系列的衍生物,即蛋白酶体抑制剂类化合物。目的:我们对这些化合物进行活性筛选,为求能发现接近甚至高于PI-1840对宫颈癌细胞抑制率的化合物,同时为设计下一步的筛选工作提供理论依据。方法:首先确定PI-1840在HeLa细胞中的IC50,然后使用此浓度作为实验浓度,将各实验化合物配置成溶液;使用CCK-8法检测各化合物对HeLa细胞增殖的抑制率,筛选出HeLa抑制活性接近甚至超过PI-1840的化合物。结果与讨论:结果显示,003系列化合物活性均较低,而007与013系列有部分化合物具有较高的HeLa细胞抑制活性。因此我们初步得出结论,003系列化合物的结构不是我们期望中理想的蛋白媒体抑制剂结构,而007与013系列中活性较高的化合物可能符合我们的期望,可以进行进一步的实验进行确定。