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PTEN (phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten)基因是1997年发现的一种新的肿瘤抑制基因。它在很多种肿瘤中存在着突变和缺失，与肿瘤的发生密切相关。PTEN具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶双重活性，是目前为止发现的第一个具有脂质磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN的蛋白磷酸酶活性具有抑制细胞侵袭的作用；PTEN的脂质磷酸酶活性具有抑制细胞周期进展和诱导细胞凋亡的作用。 肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是常见的恶性肿瘤之一。HCC的发生是一个十分复杂和多步骤的过程，其中可能有多种抑癌基因的改变。因此，对抑癌基因的深入探讨，无论对HCC发病机理的阐明，还是对HCC的预防和治疗，都具有重要的意义。 1、采用原位分子杂交和免疫组化SP法检测了PTEN mRNA及其蛋白在HCC中的表达情况。结果发现：(1)56例HCC组织中，PTEN mRNA与蛋白的阳性表达率分别为62.5％(35／56)和71.4％(40／56)。(2)17例肝硬化组织中的阳性表达率分别为88.2％(15／17)和94.1％(16／17)。(3)21例癌旁组织中的阳性率分别为90.5％(19／21)和100％(21／21)。HCC与肝硬化组织和癌旁肝组织中PTEN mRNA及其蛋白的表达具有显著性差异(P＜0.05)。其中分化程度最低的Ⅲ级HCC的阳性率最低，分别为42.9％(9／21)和57.1％ 第四军医大学硕士学位论文（12／21）。I、11级与m级 HCC组织中的 PTEN InRNA及其蛋白阳性表达率具有显著性差异o＜0．05卜＊CC组织中存在较高比例的P＊＊N m RNRNA和蛋白表达缺失，且恶性程度最高的 HCC组织中，PTEN InRNA和蛋白的阳性表达率最低。提示：在 HCC的发生发展过程中，PTEN InRNA和蛋白表达缺失起着一定作用，且其缺失主要发生于肝癌晚期。这对判断患者的预后具有一定的意义。 L采用基因转染技术，将PTEN真核表达载体pBabePuroPTEN转入人肝癌细胞系HHCC中，观察其对HHCC细胞主长的影响。原位分子杂交、免疫组化、western blot等方法都证实PT’EN己被成功地转染入HHCC细胞中。并通过测量生长曲线、平板克隆形成实验等技术，观察PTEN基因对HHCC细胞生长和细胞增殖能力的影响。结果发现，稳定表达外源性PTEN蛋白的肝癌细胞克隆形成率明显降低，细胞生长减慢，表明PTEN基因具有抑制肝癌细胞生长作用。 3、采用流式细胞仪、相差显微镜、HE染色、电镜、DNA凝胶电泳、TRAP法和western blot等检测技术，进一步分析了 PTEN的作用机理。流式细胞仪的结果显示，转空质粒的HHCC细胞在G；的期分布仅为46．7％，而转染PTEN基因的HHCC细胞在＊期的分布为56二％，证明出现了q期阻滞：并且，转染阿＊N基因的细胞出现了凋亡峰，凋亡率为门厂％。相差显微镜、HE染色、电镜、DNA凝胶电泳也证实，转入PTEN基因的肝癌细胞发生了凋亡。TRAP法研究结果表明：转入PTEN基因的HHCC细胞的端粒酶活性降低，吸光度（山50叭690）为l．484土0．08，而亲本HHCC细胞及转入空质粒的HHCC细胞高水平表达端粒酶活性，吸光度（Al50－A69。）分别为2．786士0．06和2．843土0刀9。western blot结果表明，转入P’fEN基因的HHCC细胞p27Ki…蛋白表达增高。这些结果提示，PTEN可能通过抑制细胞周期、诱导细胞凋亡、降低端粒酶活性等机制来抑制细胞的增殖。此外，PTEN还可能通过上调 P27“i’‘蛋臼表达来发挥其生长抑制的作用。 3 第四军医大学硕士学位论文 本研究表明，PTEN在肝癌中的表达降低，且主要发生于低分化肝癌。PTEN可能通过抑制细胞周期、诱导细胞凋亡、降低端粒酶活性来抑制肝癌细胞的生长与增殖。此外，PTEN还有可能是通过上调 p27“i’‘蛋白表达来发挥其生长抑制的作用的。对PTEN的进一步深入研究，有助于阐明HCC的发病机制，对开展肝癌的基因治疗具有深远的意义。