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背景和目的:急性髓系白血病（AML）是一种具有高度临床异质性的血液系统髓系恶性肿瘤,表现为骨髓内造血干/祖细胞的增殖失控、分化成熟障碍等,其中有2-5%是由MLL-AF9诱导产生的AML。临床化疗手段和骨髓移植很少能够完全治愈AML,大多数AML患者都会出现耐药和复发。根本原因是无法根除拥有自我更新和化疗耐药的白血病干细胞。目前围绕AML个体化的靶向治疗进行的基因诊断和靶向药物研究是临床治疗AML的研究重点和热点,包括细胞毒性化疗试剂、单克隆抗体和靶向小分子抑制剂。ADP核糖基化因子6（ARF6）是一种GTP结合蛋白,参与细胞生物膜和跨膜蛋白物质的运输。ARF6被证实在促进多种肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移中具有重要作用。本研究旨在探究ARF6在MLL-AF9诱导的AML发生发展中发挥的具体作用,这对阐明ARF6调控AML发生发展的作用和机制具有重要意义。方法:1.构建基于Cre-LoxP系统的Arf6f/f转基因小鼠,对小鼠基因型进行PCR鉴定。2.包被MLL-AF9、Migr1和Cre逆转录病毒,用于构建敲除ARF6的MLL-AF9诱导的急性髓系白血病细胞系。3.通过一系列细胞功能性实验,增殖实验、克隆形成实验、迁移实验、耐药实验,确定ARF6参与MLL-AF9-LC（MA）细胞具体功能。4.通过分子生物学实验,Western blot、PCR、RT-PCR、qPCR等,确定敲除ARF6对其他可能的信号通路的影响。5.通过骨髓移植实验,探究ARF6敲除的细胞对小鼠生存期的影响。6.构建造血细胞敲除ARF6的小鼠模型Vav-iCre+,Arf6f/f。通过流式染色分析,观察Vav-iCre+,Arf6f/f小鼠的骨髓、脾脏中的细胞比例变化,探究ARF6在正常造血细胞的作用。结果:1.细胞体外生长曲线实验结果显示,敲除ARF6的MA-Cre的细胞数量比MA-Migr1减少2.6倍（P<0.0001）。2.细胞克隆形成实验结果显示,MA-Migr1的克隆形成总数是MA-Cre的1.4倍（P<0.0001）。3.细胞迁移实验结果显示,MA-Migr1迁移至下层培养液中的细胞数量是MA-Cre的1.8倍（P<0.0001）。4.细胞凋亡结果结果显示,MA-Cre的凋亡比例是MA-Migr1的1.1倍（P<0.001）。5.小鼠骨髓移植实验结果显示,移植MA-Cre的小鼠比移植MA-Migr1的小鼠生存期延长2.6倍（P<0.001）。6.Western blot实验结果显示,敲除ARF6极大降低了MLL-AF9（MA）细胞中AKT的磷酸化水平。7.流式分析结果显示,完全敲除ARF6的Vav-iCre+,Arf6f/f小鼠骨髓和脾脏内各种造血细胞所占比例与对照组相比无明显差异（P>0.05）。8.体外增殖克隆实验结果显示,完全敲除ARF6极大损害了MA-pre-LC的增殖克隆能力。9.流式检测细胞凋亡结果显示,完全敲除ARF6不影响MA-pre-LC细胞凋亡水平。结论:1.ARF6敲除后不影响正常状态下小鼠的造血功能。2.ARF6敲除抑制MLL-AF9诱导的急性髓系白血病细胞的增殖和迁移能力。3.ARF6敲除后延长了MA发病小鼠的生存期。4.ARF6参与调控PI3K/AKT信号通路。