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第一部分长型瘦素受体,脂联素受体1、脂联素受体2在正常肾上腺皮髓质和肾上腺皮髓质肿瘤中的mRNA表达研究目的:脂肪和肾上腺分泌激素间的关系密切,脂肪可分泌瘦素、白细胞介素6等脂肪因子而对肾上腺分泌功能产生影响。本研究将观察长型瘦素受体(Ob-Rb),脂联素受体1(AdipoR1)、脂联素受体2(AdipoR2)在正常肾上腺皮、髓质和肾上腺皮、髓质肿瘤中的mRNA表达并比较其表达的差异,以探讨肾上腺及其肿瘤组织中瘦素和脂联素受体的分布特点。研究方法:1.用TRIZOL试剂分别提取人正常肾上腺皮质(n=6)、正常肾上腺髓质(n=6)、肾上腺皮质腺瘤(醛固酮分泌瘤n=14、皮质醇分泌瘤n=10)、嗜铬细胞瘤(n=20)的组织总RNA;2.逆转录后以特异的引物,分别扩增Ob-Rb、AdipoR1、AdipoR2、和内参照GAPDH;3.分别计算目的条带和内参照条带的灰度比值Ob-Rb/GAPDH、AdipoR1/GAPDH和AdipoR2/GAPDH,并对其mRNA的表达进行半定量分析,比较每一种目的基因在正常肾上腺皮质、髓质、醛固酮分泌瘤、皮质醇分泌瘤和嗜铬细胞瘤之间的表达差异。研究结果:1.在人正常肾上腺皮质(C)、髓质(M)、醛固酮分泌瘤(APA)、皮质醇分泌瘤(CS)和嗜铬细胞瘤(PHEO)组织中均存在Ob-Rb、AdipoR1和AdipoR2 mRNA的表达。2.Ob-Rb mRNA在正常肾上腺皮质中的表达明显高于髓质、醛固酮分泌瘤、皮质醇分泌瘤和嗜铬细胞瘤组织。在醛固酮分泌瘤中的表达明显高于皮质醇分泌瘤。Ob-Rb/GAPDH在不同组织中的表达分别为:正常肾上腺皮质(0.32+0.12)、髓质(0.07±0.03 p＜0.01 Vs C)、醛固酮分泌瘤(0.15±0.10 p＜0.01 Vs C)、皮质醇分泌瘤(0.05±0.02p＜0.05 Vs APA,p＜0.01 Vs c)和嗜铬细胞瘤组织(0.14±0.09)。3.AdipoRl mRNA在正常肾上腺皮质内的表达明显低于皮质醇分泌瘤和醛固酮分泌瘤,但明显高于肾上腺髓质;在嗜铬细胞瘤内AdipoR1/GAPDH明显高于正常肾上腺髓质。AdipoR1/GAPDH在不同组织中的表达分别为:正常肾上腺皮质(0.30±0.03)、髓质(0.17±0.04 p＜0.01 Vs C)、醛固酮分泌瘤(0.58±0.22 p＜0.01 Vs C)、皮质醇分泌瘤(0.48±0.13p＜0.01 Vs C)和嗜铬细胞瘤组织(0.49±0.25p＜0.05 Vs M)。4.AdipoR2 mRNA正常肾上腺皮质内的表达明显低于皮质醇分泌瘤和醛固酮分泌瘤,但明显高于肾上腺髓质。皮质醇分泌瘤内AdipoR2/GAPDH表达明显高于醛固酮分泌瘤。AdipoR2/GAPDH在不同组织中的表达分别为:正常肾上腺皮质(0.41±0.13)、髓质(0.20±0.09 p＜0.05 Vs C)、醛固酮分泌瘤(0.60±0.17 p＜0.05 Vs C)、皮质醇分泌瘤(0.84±0.34p＜0.05 Vs APA,p＜0.05 Vs C)和嗜铬细胞瘤组织(0.31±0.12)5.在良恶性嗜铬细胞瘤,肾上腺内外嗜铬细胞瘤或者家族性与散发性嗜铬细胞瘤间Ob-Rb/GAPDH、AdipoRl/GAPDH、AdipoR2/GAPDH差异均无显著性。结论:1.在人正常肾上腺皮质、髓质、醛固酮分泌瘤、皮质醇分泌瘤和嗜铬细胞瘤中均存在不同程度的Ob-Rb、AdipoR1、AdipoR2 mRNA的表达。2.Ob-Rb mRNA在正常肾上腺皮质中的表达明显高于醛固酮分泌瘤、皮质醇分泌瘤。AdipoR1、AdipoR2 mRNA在醛固酮分泌瘤、皮质醇瘤中的表达要明显高于正常肾上腺皮质,表明瘦素、脂联素在肾上腺皮质肿瘤中可能具有病理生理作用。3.AdipoR1 mRNA在嗜铬细胞瘤中的表达明显高于正常肾上腺髓质,其在嗜铬细胞瘤发生中的作用还需要进一步研究。第二部分长型瘦素受体在正常肾上腺皮髓质和肾上腺皮髓质肿瘤中的蛋白表达研究目的:前一部分的研究观察到长型瘦素受体在肾上腺皮、髓质和肾上腺皮、髓质肿瘤中均有不同程度的表达。本部分研究观察长型瘦素受体(Ob-Rb)在正常肾上腺皮、髓质和肾上腺皮、髓质肿瘤中的蛋白表达并比较其表达的差异,以从蛋白水平探讨不同肾上腺来源组织中长型瘦素受体的分布特点。研究方法:1.分别提取人正常肾上腺皮质(n=6)、正常肾上腺髓质(n=6)、醛固酮分泌瘤(n=10)、皮质醇分泌瘤(n=10)、嗜铬细胞瘤(n=20)的组织总蛋白;2.用western blot方法分别测定Ob-Rb和内参照β-actin;3.分别计算目的条带和内参照条带的灰度比值Ob-Rb/β-actin,并对其蛋白的表达进行半定量分析。研究结果:1.人正常肾上腺皮质、髓质、醛固酮分泌瘤、皮质醇分泌瘤和嗜铬细胞瘤中均存在不同程度的Ob-Rb的蛋白表达。2.Ob-Rb蛋白在正常肾上腺皮质中的表达明显高于肾上腺皮质瘤。Ob-Rb蛋白在嗜铬细胞瘤中的表达要明显高于肾上腺髓质。Ob-Rb/β-ACTIN在各种组织间分别是:正常肾上腺皮质(1.31±0.26)、醛固酮分泌瘤(0.94±0.23 p＜0.05 Vs C)、皮质醇分泌瘤(0.84±0.32 p＜0.01 Vs C)。嗜铬细胞瘤(0.22±0.09 p＜0.01 Vs M)和正常肾上腺髓质(0.08±0.04 p＜0.01 Vs C)。结论:1.人正常肾上腺皮质、正常肾上腺髓质、醛固酮分泌瘤、皮质醇分泌瘤和嗜铬细胞瘤中均存在不同程度的Ob-Rb的蛋白表达。2.Ob-Rb蛋白在正常肾上腺皮质、醛固酮分泌瘤和皮质醇分泌瘤中有不同的表达谱,Ob-Rb蛋白在正常肾上腺皮质中的表达明显高于肾上腺皮质瘤。Ob-Rb蛋白在嗜铬细胞瘤中的表达要明显高于肾上腺髓质。结合mRNA的结果,提示瘦素在肾上腺皮、髓质肿瘤的病理生理方面起一定的作用。第三部分原发性醛固酮增多症、皮质醇分泌瘤和嗜铬细胞瘤患者的血浆瘦素水平研究目的:观察原发性醛固酮增多症(原醛症)患者和嗜铬细胞瘤患者的血清瘦素水平,并与正常人相比,比较其差异,以探讨在这一人群中血浆瘦素水平的情况。研究方法:1.留取嗜铬细胞瘤患者(n=15),醛固酮分泌瘤患者(n=15),特发性醛固酮增多症患者(n=14),正常对照(n=20)和皮质醇分泌瘤(n=11)血浆标本。2.用ELISA方法测定其血浆瘦素水平;对血浆瘦素水平进行分析。研究结果:1.和年龄、体质指数匹配的正常对照相比,原醛症患者血浆瘦素水平没有明显差异。醛固酮分泌瘤和特发性醛固酮增多症间血浆瘦素水平也没有明显差异。在原醛症患者中,血浆瘦素与体质指数最为相关。2.和年龄、体质指数匹配的正常对照相比,嗜铬细胞瘤患者的血浆瘦素水平没有明显差异,嗜铬细胞瘤和正常对照组的血浆瘦素水平分别是1.61(0.65,3.22)ng/ml和1.16(0.74,4.85)ng/ml。3.和年龄、体质指数匹配的正常对照相比,皮质醇分泌瘤患者的血浆瘦素水平明显升高,皮质醇分泌瘤和正常对照组的血浆瘦素水平分别是50.00(31.74,50.00)ng/ml和13.89(7.57,16.69)ng/ml(p＜0.0 1)结论和体质指数匹配的正常人相比,皮质醇分泌瘤患者的血浆瘦素水平明显升高,原醛症和嗜铬细胞瘤患者血浆瘦素水平没有明显变化,表明糖皮质激素可能促进瘦素释放。