论文部分内容阅读
本实验采用行为学、蛋白质印迹(western blot)和免疫组织化学技术,以听空间方位分辨的正确率、,反应时和听皮层(auditory cortex)兴奋性受体亚基、抑制性受体亚基以及GAD67、 BDN、 PV的表达量为指标,研究成年后听觉强化训练对生后早期低剂量铅暴露大鼠听皮层听觉敏感性的改善效应及其细胞分子机制。一、听觉强化训练修复幼年时低剂量铅暴露诱导的听觉方位敏感性损伤实验动物分为三组：实验组(EXP,动物出生后进行低剂量铅暴露直至第21天,而后饲养在正常环境中,8周龄后进行声音方位分辨强化训练),被动组(PT,动物出生后进行低剂量铅暴露直至第21天,而后饲养在正常环境中,8周龄后进行声音方位分辨被动训练),对照组(CON,动物出生后饲养在正常环境中至8周龄,而后进行声音方位分辨强化训练)。行为训练结果显示,从训练第11天开始实验组的正确率明显低于对照组(p<0.05),但是实验组动物最终能够完成训练,正确率达到80%以上；训练自第13天至第25天实验组和对照组的反应时具有显著差异(p<0.05),然而训练后期实验组的反应时下降到与对照组基本一致(p>0.05)。这些结果表明,生后早期低剂量铅暴露造成的听觉方位敏感性损伤,成年后可以通过听空间方位分辨强化训练使其改善。该结果为成年后恢复中枢神经系统在发育过程中由于各种原因造成的损伤提供了一种可行性方案。二、听觉强化训练修复幼年时低剂量铅暴露诱导的听皮层方位敏感性损伤的细胞分子机制实验动物分成四组：铅暴露组(LE,动物出生后进行低剂量铅暴露至21天而后饲养在正常环境中),实验组(EXP,动物出生后进行低剂量铅暴露直至第21天,而后饲养在正常环境中,8周龄后进行声音方位分辨强化训练),被动组(PT,动物出生后进行低剂量铅暴露直至第21天,而后饲养在正常环境中,8周龄后进行声音方位分辨被动训练),对照组(CON,动物出生后一直饲养在正常环境中)。待EXP组和PT组动物行为训练结束后,采用蛋白质印迹和免疫组织化学技术考察四组动物听皮层兴奋性、抑制性受体亚基和GAD67、 BDNF、PV的表达量的变化。蛋白质印迹结果显示：1、幼年时期低剂量铅暴露明显降低了GABAA受体β2/3亚单位、AMPA受体GluR2亚单位和NMDA受体2A、2B亚单位的表达水平,而GABAA受体α3亚单位的表达水平明显提高,但是GAD67的表达水平没有明显变化；2、幼年时低剂量铅暴露但成年后经过强化训练的动物,其兴奋性、抑制性受体亚基的表达水平与对照组动物没有显著性差异(p>0.05),与铅暴露组动物具有显著差异(pr<0.05)。免疫组织化学结果显示：低剂量铅暴露组与对照组相比,皮层各层BDNF和PV的阳性神经元的数量均具有显著差异,但是成年后经过强化训练的EXP组动物其皮层各层BDNF以及PV的阳性神经元的数量与对照组没有显著性差异(p>0.05),与铅暴露组存在显著差异(p<0.05)。这些结果表明,生后早期低剂量铅暴露造成听皮层兴奋性、抑制性受体亚基和PV、 BDNF的表达异常,成年后可以通过听空间方位分辨强化训练使其改善达到正常水平。我们的研究提供了知觉强化训练改善低剂量铅暴露对听空间方位敏感性影响的可能的细胞分子机制。