基于苦参碱类生物碱具有抗肿瘤活性,但由于天然药物中成分复杂,苦参碱类生物碱结构相似,分离难度大,因此开发出一种高效萃取,筛选苦参碱类活性化合物的技术具有重要意义。本课题研究思路:以苦豆子中活性成分苦参碱为模板分子,通过分子印迹-固相萃取技术富集分离苦豆子提取液中的活性成分群,同时结合液质联用对富集成分进行结构解析,建立了一套MISPE-HPLC定量分析的色谱法。之后运用计算机辅助药物设计,旨在优选出对Topo I最具有潜在药效活性的苦参碱类抑制剂。为从中药复杂体系中富集微量活性成分建立快速、简便的方法,本课题主要采用分子印迹及分子对接双策略技术对苦豆子中生物碱的抗肿瘤活性成分进行研究。其主要工作包括以下三个方面:一、苦参碱分子印迹聚合物的制备及表征:以苦参碱为模板分子,采用沉淀聚合法得到形貌及性能良好,粒径在600-900nm范围内的分子印迹聚合物。通过透射电镜、扫描电镜、红外光谱仪观察其形貌及结构组成,并结合动态/静态吸附实验、特异性吸附实验对其吸附性能以及分子识别性能进行表征,实验结果表明该印迹聚合物具有特异识别性,并且在200min时达到吸附饱和(Qmax=49.97mg/g)。因此可将其作为固相萃取剂,用以分离富集药用植物中低含量的苦参碱及其类似物成分。二、MISPE-HPLC色谱法定向分离富集苦豆子中4种苦参碱类生物碱:为了快速分离苦豆子中活性生物碱成分,本实验结合液质联用技术进行化合物解析,结果表明苦豆子提取液中苦参碱,氧化苦参碱,槐果碱,氧化槐果碱四种生物碱成分被定向分离得到。并采用分子印迹固相萃取-高效液相色谱法对这四种成分进行了定量分析。结果表明,四种生物碱的线性关系较好(r≥0.9974),平均回收率为89.6%-98.0%。与C18柱净化相比,该柱能够有效去除基质效应,实现了苦豆子提取液中苦参碱类化合物的特异性分离富集和检测。三、苦参碱类生物碱与Topo I的分子对接:本研究运用计算机辅助药物设计(discovery studio2.5)中分子对接方法对配体(苦参碱类)与受体(DNA拓扑异构酶Ⅰ)之间的结合位点以及相互作用力进行了分析。实验结果表明,将配体化合物放入受体蛋白活性位点AC1空腔中,发现氧化槐果碱、槐定碱与靶标蛋白结合力较高,其发挥主要作用的为活性氨基酸A:LYS425等残基。另一方面利用软件寻找到的蛋白位点3与位点6,分别与配体小分子氧化苦参碱以及槐定碱通过碳氢作用等相互作用力稳固了其在位点中的位置。但位点3与位点6是否作为为活性位点,需要后续药理实验进行印证。将计算机辅助药物设计作为前期预测筛选不仅极大地缩短时间节省成本,同时对加速中药活性成分的开发具有重要的研究意义。