【摘 要】
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为研制安全有效的PRRSV基因工程疫苗,本研究首先利用吉林地区一疑似PRRS的病猪肺脏,通过MARC-145细胞传代、血清学鉴定及病毒理化学特性等方法鉴定,获得了一株PRRSV, JL-0605
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为研制安全有效的PRRSV基因工程疫苗,本研究首先利用吉林地区一疑似PRRS的病猪肺脏,通过MARC-145细胞传代、血清学鉴定及病毒理化学特性等方法鉴定,获得了一株PRRSV, JL-0605。采用RT-PCR方法扩增了PRRSV JL-0605主要免疫原性蛋白GP5和M,将其克隆到犬2型腺病毒E3缺失性载体中,获得了携带GP5和M两个基因的重组感染性全基因组,转染细胞获得了重组病毒,通过对重组病毒酶切鉴定,确定GP5、M重组犬2型腺病毒构建成功。传代表明该病毒稳定,TCID50为105.25/0.1mL。感染细胞经IFA检测可观察到特异性荧光,表明PRRSV GP5、M蛋白获得了表达。以GP5、M蛋白重组犬2型腺病毒免疫小鼠,2周开始检出中和抗体,6周达到高峰,抗体效价达到1:16,同时产生了较明显的淋巴细胞增殖效应。该结果说明,GP5和M蛋白同时表达能显著增强体液免疫应答和细胞免疫应答。GP5、M蛋白重组犬2型腺病毒免疫3月龄仔猪,第10周中和抗体效价达到最高水平,说明该重组疫苗可有效诱导和维持PRRSV特异性抗体。以上研究为PRRS的特异性免疫研究奠定了基础,为有效抗原的筛选和预防制剂的研制提供了重要手段。
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