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沙门氏菌血清型众多,在自然界中分布广泛,可以感染不同日龄的鸡,雏鸡更容易感染该菌且死亡率较高,成年鸡感染该菌后很少引起严重的临床疾病,但会导致体重减轻、产蛋率下降、腹泻和生殖道病变,给畜禽养殖业带来很大损失。人误食沙门氏菌污染的肉、蛋、奶等食物会感染沙门氏菌而引发食物中毒,造成严重的公共卫生危机。选育抗沙门氏菌的品种鸡,建立健康的种鸡群,是解决这一问题的关键。Toll样受体(TLRs)是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁,TLRs在抗细菌感染,引发机体免疫应答中起着非常重要的作用。本研究旨在探索地方鸡种TLR4基因的遗传多态性,以不同鸡种TLR4遗传差异为切入点,进行鼠伤寒沙门氏菌接种试验,研究寿光鸡和济宁百日鸡的抗沙门氏菌差异,有助于我们揭示地方鸡种抗病特性,为家禽抗病遗传育种奠定基础。本研究以山东省地方鸡种济宁百日鸡、莱芜黑鸡、芦花鸡、鲁西斗鸡、寿光鸡及商品鸡海兰褐和AA肉鸡为试验材料,采用直接混池测序法发掘TLR4基因外显子上的SNPs。根据多态位点对TLR4蛋白功能的影响,选择多态性位点C77T和G247A,利用直接测序法对所有试验鸡进行基因分型。结果表明,在7个鸡群中TLR4基因共发现了17个SNPs,第一外显子上1个,第二外显子上2个,第三外显子上14个。对所有试验鸡第一、二外显子上的非同义突变位点C77T和G247A进行多态性分析,C77T位点在芦花鸡偏离Hardy-Weinberg平衡,在其它4个地方鸡种和2个商业品种都处于Hardy-Weinberg平衡,其多态信息含量在寿光鸡最高;G247A位点在5个地方鸡种中均处于Hardy-Weinberg平衡状态,而在两个商业品种都偏离Hardy-Weinberg平衡,其多态信息含量在寿光鸡最低。为比较寿光鸡和济宁百日鸡两个品种鸡对抗沙门氏菌感染的差异,选取沙门氏菌阴性的1日龄寿光鸡和济宁百日鸡,随机分为两组,分别接种0.3mL的磷酸盐缓冲液和鼠伤寒沙门氏菌菌液。寿光鸡接种后第1、3、7和14天进行血清抗体水平检测、接种后第7天空肠、回肠、盲肠和十二指肠四种肠组织TLR4基因表达测定,并对所有试验鸡进行基因分型与抗体水平进行相关性分析。济宁百日鸡接种后第1、3和7天进行血清抗体水平检测、盲肠和脾脏TLR4、5、15和21基因表达测定和接种后第7天十二指肠形态学变化检测。结果显示,两个品种鸡对照组之间,在接种后第1和3天,寿光鸡血清抗体水平显著高于济宁百日鸡,而接种后第7天其抗体水平显著低于济宁百日鸡。寿光鸡盲肠中TLR4基因的表达量在接种后第1和7天显著低于济宁百日鸡,而接种后第3天两鸡种其表达量差异不显著;两个品种鸡试验组之间,接种后第1和3天,血清抗体水平及盲肠中TLR4基因表达量差异不显著,但接种后第7天,济宁百日鸡血清抗体水平和盲肠TLR4基因表达量均显著高于寿光鸡。寿光鸡TLR4基因C77T和G247A位点不同基因型及不同组合基因型(CC/GG和CT/GG)与血清抗体水平相关性分析发现,在相同时间点,不同基因型及组合基因型的抗体水平差异不显著;但随着时间变化,不同基因型及组合基因型的抗体水平差异极显著。接种后第7天寿光鸡不同肠组织TLR4表达量差异极显著,十二指肠TLR4基因表达量最高,盲肠TLR4表达量最低。济宁百日鸡对照组和试验组的十二指肠绒毛长度在接种后第3和7天差异极显著,十二指肠绒毛长度和隐窝深度比值在接种后7天差异极显著。其盲肠组织TLR5表达量在接种后第1和3天显著高于对照组,TLR15表达量在接种后第3和7天差异极显著,TLR21表达量在接种后第7天显著高于对照组;脾脏TLR5、15的表达量在三个时间点均无明显差异,TLR21在接种后第1天极显著高于对照组。综上所述,沙门氏菌对十二指肠形态结构造成损伤,两品种鸡TLR4对沙门氏菌应答反应不同,不同TLRs在鸡感染沙门氏菌的应答中起重要的作用。