【摘 要】
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目的:研究七藤脉宁方通过防治颈动脉斑块形成和抑制炎性因子活化而发挥保护脑组织的作用。方法（1）本次实验所用的SPF级雄性SD（Sprague Dawley）大鼠全部由宁夏医科实验动物中心大学提供。将大鼠随机分为七藤脉宁方组、阿司匹林组、阿托伐他汀钙组、模型组、假手术组及空白对照组,每组SD大鼠10只,除空白组外,其余各组SD大鼠均采用高脂饲料干预完成颈动脉斑块模型的制备;除空白组和假手术组外,其余
【基金项目】
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导师赵凯教授2018年国家自然科学基金项目的子课题；
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目的:研究七藤脉宁方通过防治颈动脉斑块形成和抑制炎性因子活化而发挥保护脑组织的作用。方法（1）本次实验所用的SPF级雄性SD（Sprague Dawley）大鼠全部由宁夏医科实验动物中心大学提供。将大鼠随机分为七藤脉宁方组、阿司匹林组、阿托伐他汀钙组、模型组、假手术组及空白对照组,每组SD大鼠10只,除空白组外,其余各组SD大鼠均采用高脂饲料干预完成颈动脉斑块模型的制备;除空白组和假手术组外,其余各组SD大鼠分别在颈动脉斑块模型建立后,再完成中动脉缺血模型制备;（2）模型制备:模型一高脂饲料干预,注射维生素D3进行辅助干预,6周后,采用颈部血管彩超观察颈动脉斑块的形成状况,判断颈动脉斑块模型的成功与否;禁食12小时后进行模型二的建立,模型二中动脉闭塞（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）脑缺血模型的建立,用国际通用线栓法进行建立,线栓于中动脉闭塞2h后拔出线栓完成再灌注损伤模型的建立,并用国际8分评分法进行神经功能测评,选取4分及以上的SD大鼠模型,进行下一步研究;（3）双模型建立完成后,空白组无干预,假手术组和模型组采用生理盐水进行灌胃,其余三个药物组选用对应的药物进行灌胃,并于药物干预后的1d、3d、7d取脑组织,进行指标检测;（4）用Western Blot检测颈动脉斑块形成大鼠脑缺血再灌注后脑PKC?和PKC?信号蛋白的表达;用苏木精伊红（HE）染色观察神经细胞的形态。结果1.神经功能测评结果:与空白组和假手术组相比,模型组与三个药物组的神经功能测评损伤有显著性差异（P＜0.001）,说明脑缺血模型制备成功。并且随着药物的持续干预,损伤的神经功能开始恢复。2.颈动脉B超结果:空白组和实验组（高脂饲料喂养）相比,实验组SD大鼠的颈动脉可见血管内壁增厚,形态异常,回声较大,斑块形成,说明颈动脉斑块模型建立合格。3.颈动脉HE染色:空白组和实验组（高脂饲料喂养）相比,实验组SD大鼠的颈动脉血管内膜异常增粗,部分内皮细胞开始凋亡,并伴有脂质的沉积。4.脑组织HE染色:与空白组和假手术组相比,模型组的大鼠脑组织则大面积梗死,脑组织染色变浅,大量的神经元细胞骨架破坏,形态皱缩,空泡结构出现、细胞质中的嗜酸性较前增强、细胞核开始破裂、淋巴细胞浸润,这些病理演变导致了神经元的坏死。与模型组比较,三个药物组的脑组织病理反应较轻。说明通过药物干预可有效缓解脑缺血再灌注的损伤,保护神经细胞。5.内皮细胞形态:与空白组和假手术组比较,模型组脑微血管内皮细胞凋亡,血脑屏障被破坏,并随时间的延长而加重;与模型组比较,三个药物组脑微血管内皮细胞损伤较轻,并随给药时间的延长,内皮细胞增多,血脑屏障被修复。其中,七藤脉宁方的效果最明显。6.各组PKCγ蛋白的表达:与空白组和假手术组比较,模型组PKCγ表达增加（P＜0.001）;与模型组比较,三个药物组PKCγ表达均减少（P＜0.01）;组内比较,3d与1d各药物组比较无显著性差异;7d与1d、3d比较,各药物组比较PKCγ表达减少（P＜0.01）;组间比较,1d、3d时三个药物组间比较无显著性差异,7d时阿司匹林组与阿托伐他汀钙组比较PKCγ表达减少（P＜0.01）,阿司匹林组与七藤脉宁方组比较PKCγ表达减少（P＜0.05）。说明七藤脉宁方可有效抑制PKCγ蛋白活化,从而达到保护脑组织的作用,并随时间的延长,疗效处于平稳状态。7.各组PKCδ蛋白的表达:与空白组和假手术组比较,模型组PKCδ表达增加（P＜0.01）;与模型组比较,三个药物组PKCδ表达均减少（P＜0.01）;组内比较,3d与1d各药物组比较,阿司匹林组和七藤脉宁方组PKCδ表达均减少（P＜0.05）,阿托伐他汀钙组PKCδ表达均减少（P＜0.01）;7d与1d、3d比较,各药物组比较PKCδ表达均减少（P＜0.01）;组间比较,1d时三个药物组间比较,阿司匹林组与阿托伐他汀钙组比较PKCδ表达减少（P＜0.05）,七藤脉宁方组与阿托伐他汀钙组比较PKCδ表达减少（P＜0.01）;3d时,阿司匹林组、七藤脉宁方组与阿托伐他汀钙组比较PKCδ表达均减少（P＜0.05）;7d时,三个药物组间比较无显著性差异。随着干预时间的增加七藤脉宁方对PKCδ表达的影响越显著,这些结果表明七藤脉宁方可有效抑制PKCδ蛋白活化,从而达到保护脑组织的作用,并随着时间的延长,疗效处于平稳状态。结论1.七藤脉宁方对大鼠颈动脉斑块形成和脑缺血再灌注损伤引起的神经功能损伤和内皮细胞凋亡,具有良好的修复作用。2.七藤脉宁方可能通过抑制PKC?/PKC?信号通路的表达,从而减轻了大鼠颈动脉斑块形成和脑缺血再灌注损伤后的炎症反应,从而发挥了保护脑组织的作用。
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