目的：　　1.采取噻唑蓝比色法（MTT）检测血根碱对小鼠胰腺癌Panc02细胞增殖的影响；　　2.采取磷脂结合蛋白V/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染色后通过流式细胞仪检测血根碱对小鼠胰腺癌Panc02细胞凋亡的影响；　　3.采取花青染料（JC-1）检测血根碱对小鼠胰腺癌Panc02细胞线粒体膜电位的变化，并初步探讨凋亡作用途径；　　4.采取蛋白免疫印迹法（Western blot）检测血根碱对小鼠胰腺癌Panc02细胞中凋亡关键蛋白Bcl-2、Bax和PI3K/AKT信号通路中关键蛋白p-PI3K、p-Akt、PI3K、Akt表达变化，并初步探讨其作用机制。　　方法：　　1. 以小鼠胰腺癌Panc02细胞为研究对象，实验组设计为：空白对照组、血根碱药物实验组分别为0.5、1、2、3、4、5、6 μM，体外培育Panc02细胞，采取MTT法观察血根碱对Panc02细胞增殖的影响；　　2. 经0、2、4、6 μM血根碱药物浓度组分别孵育Panc02细胞24 h后，采取倒置显微镜观察Panc02细胞形态改变并拍照，随后，进一步采用Annexin V-FITC/PI双染后通过流式细胞仪检测各组浓度组Panc02细胞凋亡率情况；　　3. 经0、2、4、6 μM血根碱药物浓度组分别孵育Panc02细胞24 h后，加入JC-1染料工作液处理后，首先采用倒置荧光显微镜下观察红、绿色荧光强度变化，其次采用流式细胞仪分析绿色荧光定量值，证实血根碱对Panc02细胞线粒体膜电位的变化影响；　　4. 经0、2、6 μM血根碱药物浓度组分别孵育Panc02细胞24 h后，首先采用 Western blot检测Panc02细胞凋亡的关键蛋白Bcl-2、Bax表达变化，其次进一步检测Panc02细胞中PI3K/AKT信号通路中关键蛋白p-PI3K、p-Akt、PI3K、Akt表达变化，证实血根碱可能通过PI3K/AKT信号通路诱导Panc02细胞凋亡。　　结果：　　1.血根碱对小鼠胰腺癌Panc02细胞增殖的影响　　分别采用2、3、4、5、6 μM组孵育Panc02细胞后，与空白对照组比较(*P＜0.05)，随着药物浓度的增加对细胞生长抑制率逐渐升高；同一浓度的血根碱作用Panc02细胞后，在不同时间段中（24、48、72 h），与空白对照组比较，随着时间的延长对细胞生长抑制率逐渐升高(▲P＜0.05)，提示血根碱以药物剂量-时间依赖性抑制Panc02细胞增殖。　　2.血根碱对小鼠胰腺癌Panc02细胞凋亡的影响　　2.1.Panc02细胞形态学改变　　经0、2、4、6 μM 血根碱分别孵育Panc02细胞24 h后，随着药物浓度的增加，活性细胞总数目逐渐减少，并且出现细胞皱缩变圆并体积变小，细胞之间由原先紧密接触变得稀疏，上清液可见一些漂浮的凋亡细胞，2 μM组与空白对照组比较，未见明显变化。4 、6 μM组与空白对照组比较，其凋亡形态学变化明显。　　2.2.流式细胞仪分析Panc02细胞凋亡率变化　　经0、2、4、6 μM血根碱分别孵育Panc02细胞24 h后，早期凋亡率分别为1.31±0.4%、1.72±0.59%、2.99±0.83%、6.49±0.67%，晚期凋亡率分别为1.43±0.41%、2.25±0.09%、4.49±1.22%、7.65±0.97%，伴随着血根碱浓度增加，则早期凋亡率和晚期凋亡率均分别升高，与空白对照组比较，4、6 μM组均有所升高，差异均有统计学意义(*P＜0.05)，与2 μM组比较，6 μM组升高，差异均有统计学意义(▲P＜0.05)。　　3.血根碱对小鼠胰腺癌Panc02细胞线粒体膜电位的变化　　3.1.JC-1染色后采取荧光显微镜检测红、绿荧光强度变化　　经0、2、4、6 μM血根碱分别孵育Panc02细胞24 h后，空白对照组几乎都是红色荧光，伴随着药物浓度的增加，红色荧光慢慢变少，而绿色荧光渐渐增多，4、6 μM组时红色荧光强度均削弱，绿色荧光强度均增强，6 μM组表现的更为明显。　　3.2.JC-1染色后采取流式细胞仪分析绿色荧光定量结果　　经0、2、4、6 μM血根碱分别孵育Panc02细胞24 h后，随着药物浓度的增加，绿色荧光定量值渐渐地升高，分别为2.07%，5.35%，11.29%，16.50%，与空白对照组比较，4 、6 μM组均有所升高，差异具有统计学有意义（*P＜0.05），与2 μM组比较， 6 μM组升高，差异有统计学意义（▲P＜0.05）。　　4.血根碱对小鼠胰腺癌Panc02细胞凋亡相关蛋白表达影响　　4.1.起初采取Western blot检测Panc02细胞凋亡关键蛋白Bcl-2、Bax表达变化　　经0、2、6 μM 血根碱分别孵育Panc02细胞24 h后，与空白对照组比较，2 μM组Bcl-2、Bax蛋白表达水平几乎均无变化，无统计学意义 (P＞0.05)。与空白对照组比较， 6 μM组Bcl-2蛋白表达下调，Bax蛋白表达升高，差异具有统计学有意义(*P＜0.05)；与2 μM组比较，6 μM组Bcl-2蛋白表达下调，Bax蛋白表达上调，差异具有统计学有意义(▲P＜0.05)。　　4.2.最后进一步检测Panc02细胞中PI3K/AKT信号通路中关键蛋白p-PI3K、p-Akt、PI3K、Akt表达变化　　经0、2、6 μM 血根碱分别孵育Panc02细胞24 h后，与空白对照组比较，2 μM组p-PI3K、p-Akt蛋白表达几乎无变化，无统计学意义 (P＞0.05)。与空白对照组比较，6 μM组p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均下调，差异具有统计学有意义（*P＜0.05）；与2 μM组比较，6 μM组p-PI3K、p-Akt蛋白表达均下调，差异具有统计学有意义 (▲P＜0.05)。　　结论：　　1.血根碱抑制小鼠胰腺癌Panc02细胞增殖，其生长抑制率以药物剂量-时间依赖性呈正相关；　　2.血根碱诱导小鼠胰腺癌Panc02细胞凋亡，且凋亡率随药物浓度增加而升高；　　3.血根碱可以降低小鼠胰腺癌Panc02细胞线粒体膜电位变化，其作用机制可能经线粒体凋亡途径有关；　　4.血根碱通过抑制PI3K/AKT信号通路有效地促进小鼠胰腺癌Panc02细胞经线粒体凋亡途径诱导凋亡，其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路中关键蛋白p-PI3K、p-Akt表达水平以及下调抑制凋亡蛋白Bcl-2和上调促进凋亡蛋白Bax表达水平有关。