【摘 要】
：
胰高血糖素样肽-2（Glucagon-like peptide-2,GLP-2）是胰高血糖素原的衍生肽,其主要功能是促进肠道绒毛生长、刺激肠道隐窝内细胞增殖分化。目前临床上用于治疗一些肠道炎症性疾
论文部分内容阅读
胰高血糖素样肽-2（Glucagon-like peptide-2,GLP-2）是胰高血糖素原的衍生肽,其主要功能是促进肠道绒毛生长、刺激肠道隐窝内细胞增殖分化。目前临床上用于治疗一些肠道炎症性疾病,例如短肠综合征、肠炎性腹泻等。此外,在畜牧业中,GLP-2对家畜肠道疾病也有一定的预防效果。GLP-2血浆半衰期很短,在人体内大概只有7 min,这是因为体内二肽激酶（dipeptidyl peptidase IV,DPP-4）能够识别并水解GLP-2第二位的丙氨酸氨基末端,若将第二位丙氨酸用甘氨酸替换则可以抵抗DPP-4酶水解,延长药物半衰期。虽然GLP-2有着广泛的应用前景,但是从自然资源中获得GLP-2的活性损失大、得率低且过程繁琐,化学合成工艺复杂且纯度难以保证,两种方法均难应用于GLP-2工厂化大量生产。如何快速、较低成本、便捷的生产出有活性的GLP-2是本课题拟解决的问题。本实验利用基因工程技术表达出定点诱变的猪源性GLP-2,用甘氨酸取代GLP-2氨基末端第二位丙氨酸后,再根据大肠杆菌的偏好性对GLP-2序列进行优化,并在目标肽序列N端添加肠激酶识别位点,合成基因序列。通过Kpn I和Xho I双酶切位点连接到pET-40b（+）构建原核重组表达载体pET-40b（+）-GLP-2,重组质粒转化进大肠杆菌BL21菌株,诱导表达重组蛋白。优化后表达参数为:菌液OD600为0.6时,用0.2 mmol/L IPTG,37℃,诱导培养5 h;最终得到GLP-2重组蛋白表达量较高的基因工程菌株。通过镍离子亲和层析柱纯化以及分梯度洗脱获得纯度较高的GLP-2重组蛋白,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定其为目的蛋白。在体外,通过检测GLP-2重组蛋白对IPEC-j2细胞的增殖以及对该细胞下游因子mRNA表达量的影响,证实其体外活性;在体内,通过GLP-2重组蛋白对KM小鼠体重变化的影响、对肠道下游因子mRNA表达量的影响以及对LPS诱发小鼠肠道炎症的预防效果等,证明了重组蛋白在生物体内的活性。本实验为GLP-2功能性研究以及在工厂化的生产应用奠定了基础。
其他文献
自1958年《关于现役军官退休处理的暂行规定》颁布以来,经过五十多年的发展,军休干部养老服务相关政策逐步完善,也顺应社会发展做出了相应调整,因此在大政策环境下,军休干部
实地建造了单层和双层2种经过结构优化的轻简装配式日光温室。在结构优化、温度性能和建设成本3方面,分别与对应的对照温室进行比较,主要结论有:1.单层轻简装配式日光温室1.1结构优化方面。试验温室与传统砖墙日光温室相比:土建工序、施工周期、主要工程量等大幅减少,节省35%-100%不等;农机出入口效率和更换棚膜效率均提升约50%。1.2温度性能方面。试验温室与传统砖墙日光温室相比:在长周期、短周期、极
目的:分析将开始肠内营养作为质子泵抑制剂(proton pump inhibito rs,PPIs)的停药时机对重症监护室患者呼吸机相关性肺炎(Ventilator as sociated pneumonia,VAP)发生率、应激性溃疡(stress ulcer,SU)发生率、总气管插管时间、重症医学科停留天数、死亡率等的影响,为选择PPIs的停药时机提供理论依据。方法:通过东软病历系统,经筛选后
纳米金刚石(ND)是近年来研究的热点之一。纳米金刚石是一种性能优异的纳米粒子,不仅具有纳米颗粒的优点,如高比表面积、高活性表面、量子效应、小尺寸效应,还表现出其他优异
南极冰架、冰川等储存了地球上大约70%的淡水资源,监测南极地区的冰架具有重要的意义。卫星雷达高度计能够进行全天时、全天候的探测,且观测的尺度较大,是研究冰架厚度的一种可靠手段。CryoSat-2卫星搭载的雷达高度计,采用了干涉测量技术和合成孔径技术,测高精度和空间分辨率都比传统的雷达高度计高。目前,利用卫星雷达高度计估算冰架厚度主要存在以下问题:一是需要借助其它数据对地表类型进行分类,与高度计数据
激光诱导击穿光谱(Laser Induced Breakdown Spectroscopy,LIBS)技术作为一种新兴的物质分析方法,由其独特的无需样品预处理、无接触、多成分同时检测、实时在线测量等特性广泛应用于各种领域。高能量脉冲激光聚焦样品表面产生等离子体,等离子体遇冷辐射出元素特征光谱,通过对光谱进行分析实现元素的定性和定量检测。随着激光器、光谱仪、光学系统等仪器设备的发展,LIBS系统在远
NADH（Nicotinamide adenine dinucleotide）被称为21世纪“生物火箭燃料”,广泛用于保健品行业,为人们延年益寿做出了重要贡献。NADH是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的还原态,具有不耐酸
近年来,基于钙钛矿材料本身优异的光电性能,钙钛矿太阳能电池得到了迅速的发展,如今效率已经突破25.2%。低廉的材料成本和简单的制备工艺使得钙钛矿太阳能电池拥有广阔的商业化前景。研究表明界面层材料在钙钛矿太阳能电池中起着至关重要的作用,不仅可以保证钙钛矿吸收层中载流子的高效分离与传输,还有助于提高器件的稳定性。本论文主要针对反向平面结构钙钛矿太阳能电池的界面层,通过新材料的引入或对原有制备工艺的优化
自动驾驶或辅助驾驶中的核心任务之一是环境感知,车道线作为路面的重要标识,也是环境感知的重要部分,所以准确稳定地检测车道线是自动驾驶的基础任务之一。早期传统车道线检测工作使用手工设计的特征,只适用于理想场景下的车道线检测。随着深度学习的迅猛发展,深度神经网络也被用于车道线检测任务,基于深度学习的车道线检测在准确度和鲁棒性上都获得很大提升,但复杂场景下,例如遮挡、光线不足场景等,车道线检测任务依然具有
目的:观察熊氏十味温胆汤治疗冠心病不稳定性心绞痛气虚痰瘀证的临床疗效,并观察不良反应及安全性,以及通过汉密尔顿焦虑量表评价熊氏十味温胆汤对改善焦虑症状的疗效。方法:随机选取从2019年1月1日至2019年10月31日在湖南中医药大学第二附属医院住院的冠心病不稳定性心绞痛且符合气虚痰瘀证的患者60例,按就诊顺序分为治疗组30例、对照组30例。对照组:常规西药治疗;治疗组:在常规西药治疗的基础上加用熊